Цель работы

• зарегистрировать двухфазный потенциал действия;

• исследовать зависимость амплитуды потенциала от силы раздражающего стимула;

• определить зависимость порога раздражения нерва от длительности стимула;

• измерить продолжительность периодов абсолютной и относительной рефарктерности для нерва.

Методика.

В работе проводится внеклеточная регистрация ПД с общего ствола седалищного нерва травяной лягушки при его электрическом раздражении.

Объект: травяная лягушка

Препарат: препарат седалищного нерва лягушки

Материалы и оборудование.

• Препаровальный набор инструментов: 2 пинцета, большие ножницы, малые ножницы, 2 стеклянных крючка, хлопчатобумажные нитки для наложения лигатур.

• препаровальная ванночка

• вата, марля

• раствор Рингера для холоднокровных животных

• регистрирующая установка, блок-схема которой представлена на Рис.1

Рис. 1. Блок-схема установки для внеклеточной регистрации ПД седалищного нерва

лягушки.

1-компьютер;

2-электростимулятор;

3-изолирующий трансформатор;

4-заземляющий электрод и тампон, смоченный раствором Рингера;

5-пара регистрирующих электродов;

6-пара раздражающих электродов;

7-камера с нервом (8), закрывающаяся герметичной крышкой;

9- аналогово-цифровой преобразователь (АЦП);

10-усилитель.

Ход работы.

1. Приготовление нервно-мышечного препарата лягушки.

Он состоит из седалищного нерва и икроножной мышцы.

1. Обездвижить лягушку путем разрушения головного и спинного мозга. Для этого зонд (металлическая спица) вводится в область ромбовидной ямки ( чтобы увидеть ее, надо, держа лягушку за подмышки, оттянуть голову перпендикулярно телу), затем поворачивается на 90 градусов и вводится в полость черепа, после чего возвращается в первоначальное положение и поворачивается на 90 градусов в другую сторону и вводится в позвоночный канал.

2. Лягушку приподнять за задние лапки, чтобы голова и туловище оказались внизу. Большими ножницами перерезать позвоночник на уровне 1/3 от его нижнего конца (примерно на уровне подмышек).

3. Срезать часть кожи и свисающие внутренности. Удерживая левой рукой остаток позвоночника, правой резко стянуть кожу со спины и задних лапок (позвоночник и кожу удобнее держать за кусочек ваты). Отрезать копчиковую кость. Между двумя лапками получится небольшое отверстие.

4. Положить лапки лягушки на препаровальную ванночку. Остаток позвоночника и лобковое сочленение осторожно разрезать строго по средней линии. Разъединить лапки. Одну из лапок покрыть ваткой, смоченной раствором Рингера.

5. Стеклянным крючочком поднять нерв и отпсепаровать его, отделив от соединительной ткани и мышц, до тазобедренного соединения. После этого перевернуть препарат спинной стороной вверх. Разорвать стеклянным крючком соединительнотканную пленку между двуглавой и перепончатой мышцей, в глубине найти седалищный нерв, идущий параллельно с бедренной артерией. Поднимая стеклянным крючочком нерв и артерию, отсепаровать их до коленного сустава. Все лишние мышцы и кости обрезать.

6. Под нерв с помощью стеклянного крючка подводят нитку и крепко ее завязывают вокруг нерва. Дальнейшая препаровка икроножной мышцы для данной работы не требуется, ниже места узла на нерве все ткани можно отрезать.

2. За сегмент позвоночника с помощью пинцета и за лигатуру нерв переносят в камеру с электродами. Самой широкой частью (около позвоночника) надо разместить нерв на стимулирующих электродах. На заземляющий электрод положить ватку, смоченную раствором Рингера для уменьшения наводки. Дно камеры должно оставаться сухим, чтобы избежать шунтирования электродов. Камеру плотно закрывают крышкой, смоченной для герметичности вазелином. Это делается для того, чтобы не дать нерву высохнуть и тем самым избежать его механического повреждения, которое может привести к разнообразным нарушениям в нормальном процессе возбуждения нерва.

3. Для регистрации возбуждения мы использовали программу PowerGraph, установленную на рабочем компьютере, который через АЦП и усилитель соединен с регистрирующими электродами.

Нужно запустить программу и откалибровать установку. Для этого при помощи тумблера «Установка 0», регистрируемый сигнал устанавливается в положение 0. Далее нажать на кнопку калибровки и ручкой «Усиление» вывести линию сигнала до 1 мВ на экране. Переключить усилитель в положение работа.

На стимуляторе установить частоту 20 Гц, длительность стимула 0, 5 мс, не очень большую амплитуду стимула. После этого можно запускать запись на PowerGraph. Выполнение поставленных целей по исследованию свойств ПД целого нерва осуществляем, используя принципы, которые мы использовали при работе с компьютерной моделью Ходжкина- Хаксли.