Определение резус-фактора

Все методы определения резус-фактора делятся на серологические способы, генетический анализ и экспресс-методы, применяемые в клинике не требующие специального лабораторного оснащения.

Используются два экспресс-метода:

1. Экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом D в пробирке без подогрева.

2. Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-D Супер). Этот метод в настоящее время ведущий.

Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-d Супер)

Цоликлон анти-D имеет 2 модификации: собственно анти-D, используемый во врачебно-диагностической практике в комплексе с 10%-м желатином, и анти-D-Супер, позволяющим произвести экспресс-определение резус-фактора (при этом все резус-отрицательные пробы требуют обязательной проверки цоликлоном анти-D, так как возможен вариант носительства ослабленного антигена системы резус.)

Методика проведения.

На планшет наносят большую каплю реагента (около 0,1 мл). Рядом помещают маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов и смешивают кровь с реагентом стеклянной палочкой. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-20 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек. Результаты реакции учитывают через 3 мин. после смешивания.

Планшет после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.

При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии – как резус отрицательная.

Экспресс-метод определения Rh-фактора стандартным универсальным реагентом d в пробирке без подогрева

Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца или из вены непосредственно перед исследованием, или консервированная кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.

Методика проведения.

Исследование проводят в пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента D. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов).

Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам.

Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса "антиген - антитело" и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут.

Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем одно-двукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).

Оценка результатов.

Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.