Хроматография аминокислот на бумаге. Количественное определение белка по биуретовой реакции

Цель занятия. Ознакомиться с методом распределительной хроматографии на бумаге и количественным определением белка.

Этапы самостоятельной работы

Изучить виды хроматографического анализа, типы структурной организации белков и методы, используемые для выделения, очистки и изучения структуры белков. Использовать знания о структурной организации белков для объяснения функций организма в норме и патологии. Изучить условия проведения распределительной радиальной хроматографии аминокислот, идентификацию аминокислот на бумаге с помощью нингидриновой реакции и принцип количественного определения белка в сыворотке крови по биуретовому методу.

Вопросы для самопроверки и задания

1. На чем основан принцип распределительной хроматографии аминокислот на бумаге?

2. Как обнаружить аминокислоты при хроматографическом анализе?

3. Объясните принцип определения Rf для отдельных аминокислот.

4. Какие физико-химические свойства лежат в основе ионнообменной хроматографии?

5. На чем основан метод количественного определения белка в сыворотке крови?

6. В растворе содержится смесь двух пептидов: 1) асп – глу – ала – сер – тре – мет; 2) гли – фен – арг – гис – лей – вал. С помощью каких методов анализа можно разделить и определить их качественный состав?

7. Каково значение хроматографического и количественного методов определения белка в диагностике различных заболеваний?

8. Какие типы протеинограмм Вам известны? Как при этом изменяются содержание белковых фракций сыворотки крови?

Для самоподготовки требуется 2 ч, для оформления протоколов – 20 мин, для самопроверки – 40 мин.

Литература: 1, с. 23–33, 567–574, 577–578; 2, с. 69─73, 682─686; 3, с. 13–15, 27–38; 4, с. 20–21; 7, с. 53–60, 503–504.

Строение, свойства и функции простых белков

Семинарское занятие

Цель занятия. Ознакомиться с особенностями строения, свойствами и значением простых белков в жизнедеятельности организма.

Этапы самостоятельной работы

Обобщить сведения, полученные студентами на занятиях и в процессе самоподготовки, по следующим вопросам.

Значение белков для жизнедеятельности организма. Химическое строение белков. Классификация, химическое строение и свойства аминокислот. Типы уровней структурной организации белковой молекулы. Первичная структура белка. Типы связей аминокислот в молекуле белка, зависимость биологических свойств белков от их первичной структуры. Вторичная структура белка. Значение водородных связей в стабилизации вторичной структуры. Третичная структура белка. Значение дисульфидных связей и роль «слабых» связей (водородные и Ван-дер-Ваальса) в конформации белковой молекулы. Четвертичная структура белка. Методы, используемые для изучения структуры белковой молекулы. Физико-химические свойства белков. Зависимость заряда белковой молекулы от pH раствора. Изоэлектрическая точка белков. Факторы, способствующие осаждению белков из растворов. Использование реакций осаждения белков в диагностических целях. Белки сыворотки крови. Определение соотношения белковых фракций, альбумино-глобулинового коэффициента в диагностике ряда заболеваний. Методы выделения и очистки белков.