Реакции торможения гемагглютинации и гемадсорбции

Принцип метода применим только в вирусологии и основан на предотвращении реакции адсорбции вирусов либо на свободных танизированных эритроцитов (РГА), либо в инфицированной ими культуре тканей (РГадс) с помощью предварительной обработки вируса или вируссодержащего материала специфической иммунной сывороткой. Последующий контакт таких нейтрализованных вирусов со свободной взвесью эритроцитов или культурой ткани обычным эффектом не сопровождается. Результаты становятся противоположными:

- Вирус не адсорбируется на эритроцитах и прямого их склеивания (РГА) за счёт разницы электрического потенциала не происходит, наблюдается его торможение — РТГА.

- Вирус не адсорбируется на клетках культуры ткани, не проникает в них, не репродуцируется, а сливается из пробирки (лунки) вместе с культуральной средой. Внесение взвеси эритроцитов в культуру так называемых «инфицированных» клеток не фиксируется вирусом (его там нет). Наблюдается отсутствие РГадс или, точнее, её торможение — РТГадс.

Приложение 9

Реакция иммобилизации трепонем (рит)

(извлечение из справочника М.О. Биргера. М., 1982. С. 505-506)

Реакция основана на наблюдениях Д.К. Заболотного (1907) и П.П. Маслаковца в отношении потери подвижности белой спирохеты при добавлении к её культуре сыворотки крови больных сифилисом.

Ингредиенты реакции:

1. Антиген — взвесь тканевых спирохет (получают из размельчённого яичка кролика, заражённого сифилисом).

2. Антитело — сыворотка обследуемого больного.

Реакцию выполняют в меланжерах. Основной опыт — соединение в смесителе сыворотки больного, взвеси тканевых спирохет и активного комплемента.

После 19-20 — часовой инкубации при + 35Сº на предметное стекло наносят каплю содержимого из меланжера, кладут на неё покровное стекло и в микроскопе с темнопольным конденсором определяют количество подвижных и неподвижных спирохет. Опыт составляют с контролями и по формуле вычисляют процент специфически иммобилизированных антителами спирохет.

Результаты реакции считают положительными, если процент иммобилизации спирохет выше 50 %, слабоположительными - от 31 % до 50 %, сомнительными - от 21 % до 30 %, отрицательными — ниже 20 %.

Приложение 10

Метод флюоресцирующих антител (риф)

Принцип метода: визуальный учёт специфического взаимодействия флюоресцирующих антител с гомологичным антигеном осуществляется в сине-фиолетовых лучах люминесцентного микроскопа. МФА позволяет контролировать первую фазу серологических реакций.

Варианты риф

1. Прямой РИФ: препарат, приготовленный из инфицированного материала, фиксируют жидким фиксатором (в ацетоне), обрабатывают антителами, мечеными флюорохромом — изотиоционатом флюоресцеина (ФИТЦ), отмывают от избытка сыворотки и после высушивания рассматривают в люминесцентном микроскопе.

Достоинства метода: простота, специфичность.

Недостатки: необходим большой набор люминесцентных сывороток.

2. Непрямой РИФ (РНИФ): Используется для обнаружения антител.

Последовательность обработки препарата непрямого РИФ: препарат из инфицированного материала высушить, фиксировать химическим фиксатором, нанести испытуемую сыворотку и инкубировать во влажной камере при + 37Сº 30 минут. Тщательно промыть водой, высушить. Обработать препарат антиглобулиновой сывороткой (против глобулинов человека). Инкубировать при + 37Сº во влажной камере 15 минут. После этого промыть водой, высушить, микроскопировать в люминесцентном микроскопе.

Приложение 11