Ориентировочная ра на стекле (серотипирование бактерий)

Последовательность постановки:

- На предметное стекло нанести по 1 капле (0,05 мл) известных иммунных диагностических сывороток, разведённых физиологическим раствором 1:5 — 1:10, рядом отступив 1,5 см — каплю физ. раствора (контроль).

- Добавить к каждой капле пипеткой равный объём взвеси 24 часовой бульонной испытуемой культуры или петлю агаровой культуры.

- Слегка покачивая стекло, наблюдать за течением реакции.

- Феномен агглютинации проявляется через 5-10 минут появлением взвешенных хлопьев вначале по краям, затем — по всей капле опыта и просветлением и жидкой части. В контроле (контроль спонтанной агглютинации) антигена — жидкость мутная, гомогенная, хлопьев нет.

Приложение 3

СХЕМА ПОСТРОЕНИЯ РЕАКЦИИ НОБЛЯ

Метод Нобля основан на использовании концентрированных ингредиентов (микробной взвеси, сыворотки больного) и применении механического фактора, ускоряющего агглютинацию (энергичное встряхивание пробирок), что позволяют получить результаты через 2-5 минут.

Ингредиенты	Номер опыта					Контроль
	1	2	3	4	5	Сыворотки	Антигена
Физ. раствор, мл	0,8	0,8	0,8	0,8	0,8	0,9	0,9
Сыворотка больного в разведении 1:5, мл	0 ,1	0 ,1	0 ,1	0 ,1	0 ,1 дез. р-р	0,1	-
Разведение сыворотки	1: 10	1: 20	1: 40	1: 80	1: 160
Диагностикум (взвесь известных микробов 3-6 млрд.мт/мл)	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1	-	0,1
Встряхивать 3-5 минут, дать постоять

При оценке результатов реакции используют поправочный коэффициент 10, который отражает разницу между адсорбционными процессами в концентрированных растворах антител и в растворах обычной концентрации. Таким образом, разведение 1:20 по Ноблю соответствует 1:200 при обычной постановке развёрнутой РА.

Приложение 4

Постановка реакции хеддльсона при бруцеллезе

Принцип метода основан на использовании большого отмытого стекла фотопластины. концентрированной неразведённой сыворотки крови больного в нарастающих или уменьшающихся объёмах, дополняемой до определённого уровня физиологическим раствором, что приравнивается к разным разведениям, и окрашенного метиленовым синим диагностикума для лучшей видимости образующегося агглютината. Последнее очень важно при работе с диагностикумами из мелких бактерий (например, бруцелл). Ускорение реакции достигается смешиванием ингредиентов путём лёгкого покачивания стекла и помещения его в термостат при +37Сº. На одном стекле одновременно проводят анализ сывороток от нескольких больных. Результат получают через 2-5 минут в виде голубого агглютината разной активности в зависимости от разведений.

Приложение 5

СХЕМА ПОСТАНОВКИ ПЕРЕКРЁСТНОИ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ ПО КАСТЕЛЛАНИ

Принцип метода:

Перекрёстная РА направлена на извлечение групповых антител методом адсорбции и основана на правиле - специфический антиген (АГ) изымает из сыворотки все антитела — и специфические только для него, и групповые; неспецифический АГ — только групповые.

В данной реакции наряду со специфическим антигеном используют родственные гетерологические АГ. Например, у больного брюшным тифом (Т) сыворотка крови дала агглютинацию со специфическим диагностикумом Т и с групповым паратифа А.

Диагностикум с антигенами паратифа А (ABEF)

1 этап

2 этап

Оценка РА: в данном примере: больной страдает брюшным тифом.

Приложение 6