- •Методические рекомендации для преподавателей
- •Тема занятия. Иммунологические методы диагностики.
- •Цели занятия.
- •Этапы проведения практического занятия.
- •Ориентировочная основа действия (оод) для проведения практического занятия (курация, выполнение лабораторной работы и т.Д.).
- •Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время.
- •Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола и его оформлением.
- •9.Учебно-материальное обеспечение:
- •Ориентировочная ра на стекле (серотипирование бактерий)
- •Постановка реакции хеддльсона при бруцеллезе
- •Кровяно-капельная реакция минкевича (ра)
- •Реакции торможения гемагглютинации и гемадсорбции
- •Реакция иммобилизации трепонем (рит)
- •Метод флюоресцирующих антител (риф)
- •Варианты риф
- •Радиоиммунный метод (рим)
- •Приготовление гемолитической системы
- •Реакция торможения связывания комплемента - ртск
- •Реакция нейтрализации бактериальных экзотоксинов
- •1. Определение токсигенности бактерий на питательной среде
- •2. Единицы измерения токсина и антитоксина
- •1. Определение активности анатоксина по известной антитоксической сыворотке (титр 200 ае в 1 мл) в реакции флоккуляции
- •2. Определение титра антитоксической сыворотки по известному анатоксину (титр 5000 ie в мл) в р. Флоккуляции
- •Постановка реакции нейтрализации токсина антитоксином ин виво
- •Радиоиммунный метод (рим)
- •Иммуноферментный метод
- •Метод иммуноблоттинга
Радиоиммунный метод (рим)
Сущность метода: метод позволяет в любом биологическом субстрате (моче, крови и т.д.) определять ничтожно малые концентрации растворимых антигенов, продукты метаболизма микроорганизмов, гормоны и пр. на основе конкуренции с радиоактивным антигеном.
Этапы постановки реакции
1. Стандартное количество антигена, идентичного меченому радиоактивной меткой (например, I 123 , I 131, либо другими изотопами) антигену, наливают в пробирку.
2. Добавляют стандартное количество иммунной сыворотки, специфичной антигену. 70- 80% меченого антигена связывается при этом с антителами, образуя радиоактивный преципитат.
3. Добавляют субстрат, исследуемый на присутствие предполагаемого антигена. Если в субстрате есть антиген, идентичный меченому, то он конкурирует с ним, отнимая антитела. Радиоактивность преципитат при этом снижается.
Чем больше в субстрате антигена, тем меньше радиоактивность преципитата.
Приложение 23
Иммуноферментный метод
Сущность метода: конъюгат, образованный антителами, фиксированными на стенке лунки полистироловой пластины, и антигеном, взаимодействует с антителами, мечеными ферментом (чаще всего пероксидазой хрена) и также остаются на стенке пробирки. Не фиксированные (не отреагировавшие) субстраты сливаются из лунки и заменяются хромогеном с субстратом для индикации данного фермента. К примеру, хромогеном может служить ортофенилендиамин, субстрат для пероксидаз - перекись водорода.
Если в исследуемом субстрате были антигены, идентичные антителам, то энзим фиксируется на стенке лунки, разлагает перекись водорода и выделившийся кислород окрасит хромоген в желтый цвет.
Приложение 24
Метод иммуноблоттинга
для выявления антител в сыворотках крови больных к определенным антигенам возбудителя
Принцип метода:
1. Разделенный с помощью электрофореза комплекс антигенов в испытуемом субстрате наносят на полоску из нитроцеллюлозы. При этом разные антигены в силу разницы в электрофоретической подвижности располагаются в различных участках полоски.
2. Дальнейшее сравнительное исследование проводят по схеме сопоставления анализируемого образца с эталоном.