Иммуноферментный анализ (ифа)

№

Шаги проведения

Баллы

1

Специфицеский антиген адсорбируют в лунках полистиролового планшета.

15

2

Инкубируют с испытуемыми сыворотками человека.

5

3

Отмывают несвязавшиеся иммуноглобулины.

5

4

Связавшиеся иммуноглобулины выявляют с помощью антиглобулиновой сыворотки, к которой прикреплен фермент пероксидаза.

15

5

Добавляется субстрат (пероксид водорода) и индикатор (диамин бензидин), которые позволяют оценить ферментативную активность по интенсивности окраски.

15

6

Интенсивнось окраски можно оценить визуально или с помощью спектрофотометра.

15

7

Интенсивность окраски пропорциональна сорбированных на антигене антител.

15

8

ИФА позволяет выявить антитела к разным антигенам.

15

ИТОГО:

100

№

Шаги проведения

Баллы

1

Специфицеский антиген адсорбируют в лунках полистиролового планшета.

25

2

Инкубируют с испытуемыми сыворотками человека.

25

3

Отмывают несвязавшиеся иммуноглобулины.

5

4

Связавшиеся иммуноглобулины выявляют с помощью антиглобулиновой (человеческой) сыворотки, отмеченными радиоактивными изотопами (J 125).

25

5

При соответствии антигена и антитела образуется комплексы, количество которых устанавливается с помощью гамма или В – счетчиков.

20

ИТОГО:

100

№

Шаги проведения

Баллы

1

При прямом методе готовится препарат, содержащий исследуемые микроорганизмы (АГ).

15

2

Фиксируют его жидким фиксатором (ацетоном).

15

3

Обрабатывают специфической люминесцирующей сывороткой (ацетон).

15

4

Отмывают избыток сыворотки.

10

5

Высушивают препарат и рассматривают в люминесцентном микроскопе.

10

6

При положительной реакции наблюдаются свечение антигена.

10

7

Это реакция позволяет за 1-2 часа обнаружить микробные антигены.

10

8

Метод прост и высокоспецифичен , но требует большого набора различных люминесцирующих сывороток.

15

ИТОГО:

100