4.Подсчет клеток на мембранных фильтрах

a x F x 10³

М = --------------------------- ,

V x s

М — количество клеток в 1 мл исследуемого субстрата

а — среднее количество клеток в квадрате окулярной

сетки (поле зрения)

F — площадь мембранного фильтра в мм²

V — объем (мл) профильтрованной жидкости

10⁶ — коэффициент перевода мм² в мкм²

s — площадь квадрата окулярной сетки (поля зрения)

5.Определение количества клеток высевом на плотные питательные среды (чашечный метод Коха)

а) подсчет клеток в водных образцах

а х 10ⁿ

М = ——————

V

М — количество клеток в 1 мл

а — среднее число колоний при высеве разведения

V — объем суспензии взятый для посева

10 ⁿ — коэффициент разведения

б) подсчет клеток, находящихся в воздухе

(b)100 x a

Х = —————- x 100 (c)

S

Х — число клеток микроорганизмов в 1 м³ воздуха

а — число колоний, выросших на чашках

S — площадь чашки Петри (S == Пr², 3,14 х 25 = 78,5 )

Установлено, что на 100 см² (b) падает примерно столько микробных зародышей, сколько их находится в 10л воздуха (0,01 см³ ), а чтобы узнать, сколько клеток находится в 1 м³ воздуха, то количество микробных зародышей умножают на 100 (с)

Общая обсемененность воздуха определяется по суммарному числу колоний, выросших на двух параллельных чашках:

менее 250 колоний — воздух чистый

250-500 колоний — загрязнен в средней степени

более 500 колоний — загрязнен

в) подсчет клеток микроорганизмов в почвенных образцах

а х 10ⁿ

М = ---------------------------- в 1 мл почвенной суспензии

V

М = а x 10ⁿ в 1 г сырой почвы

а х 10ⁿ

М = ————— в 1 г абсолютно сухой почвы

0,75

0,75 — при влажности почвы 25% 1 г сырой почвы содержит 0,75 г абсолютно сухой почвы

20 — коэффициент перевода 0,05 мл в 1 мл (0,05 х 20 = 1)

10ⁿ — разведение, взятое для посева

а — число колоний, выросших на чашках

V — объем суспензии, взятой для посева ( в мл)

Если используем глубинный посев, то расчет ведем по этой же формуле без коэффициента 20; если колонии выращены на бедных средах (нитратный агар, голодный агар), то определение количества микроорганизмов ведем в поле зрения микроскопа.

6. Определение количества клеток высевом в жидкие среды (метод предельных разведений)

Используется таблица. Мак-Креди (наиболее вероятное количество клеток микроорганизмов в единице объема исходной суспензии.

(Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Егоров Н.С. МГУ, М. 1995. Стр.126-127)

Контрольные вопросы

1. На какие группы можно разделить методы количественного определения микроорганизмов?

2. Что собой представляет камера Горяева и особенности работы с ней?

3. Как ведется подсчет клеток в капиллярах Перфильева?

4. Особенности подсчета клеток на фиксированных окрашенных мазках.

5. Как применяют мембранные фильтры для подсчета клеток?

6. Подсчет колоний при высеве на плотные питательные среды.

7. Метод предельных разведений.

8. Из каких этапов состоит определение биомассы?

9. Какими способами отделяют микроорганизмы от среды?

10. Суть нефелометрического метода при определении количества клеток и биомассы.

Рекомендованный материал

1. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Егоров Н.С. МГУ, М. 1995. Стр. 117-132.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. «Спец.литература», С-Петербург. 1998. Стр. 107-110.

3. Медицинская микробиология. Гл. ред. Покровский В.И., Поздеев О.К. «ГЭОТАР Медицина». М., 1999. Стр. 996-1000.

5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. «Медицина», М. 1983. Стр. 124-132.

5. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. «Колос», М. !972. Стр.72-75, 142-157.

ЗАНЯТИЕ 9

ТЕМА: Условия культивирования и хранения культур микроорганизмов.