4. Определения продукции бактериями аммиака, индола и сероводорода

1. Для определения продукции бактериальной культурой индола применяется способ Мореля. Культуру засевают в мясопептонный бульон или пептонную воду (лучше с добавлением триптофана, при утилизации которого выделяется значительное количество этого газа) и под пробку помещают фильтровальную бумагу, пропитанную щавелевой кислотой.

а. При продукции бактериальной культурой индола нижняя часть бумажки краснеет.

б. Если культура не продуцирует индол – бумажка остается бесцветной.

2. Более надежен способ Эрлиха. В пробирку с изучаемой культурой добавляют специальный реактив.

2. Более надежен способ Эрлиха. В пробирку с изучаемой культурой добавляют специальный реактив.

а. В присутствии индола реактив краснеет.

б. Если индола нет – реактив остается бесцветным.

в. У микробов, обладающих протеолитической активностью, при утилизации белкового субстрата может образовываться (или не образовываться) аммиак. Для выявления этого признака под пробку пробирки с засеянной питательной средой помещают лакмусовую бумагу так, чтобы она не касалась поверхности среды.

1. При образовании аммиака лакмусовая бумажка синеет.

2. Если аммиак не образовывается, лакмусовая бумажка цвет не изменяет.

г. У микробов, обладающих протеолитической активностью, при утилизации белкового субстрата может образовываться (или не образовываться) сероводород.

1. С этой целью под пробку пробирки с засеянной питательной средой помещают фильтровальную бумагу, пропитанную ацетатом свинца.

а. При продукции бактериальной культурой сероводорода нижняя часть бумажки чернеет.

б. Если культура не продуцирует сероводород – бумажка остается бесцветной.

2. Однако, метод с использованием бумажки с ацетатом свинца не надежен и в настоящее время практически не используется. Продукцию бактериями сероводорода лучше определять с помощью сред Клиглера или Олькеницкого (см. выше).

2. В ряде случаев для идентификации выделенной бактериальной культуры необходимо определить продуцирует ли она конкретные ферменты. Чаще всего выясняется наличие оксидазной и каталазной активностей.

3. Ссреды гисса их состав и использование

Пептонно-углеводные среды (или среды Гисса). Их применяют для дифференциальной диагностики микробов семейства Enterobacteriaceae. Состав среды следующий: стерильная дистиллированная вода 1000 мл, пептон 10 г, хлористый натрий 5 г, углевод 10 г, 16 мл 1%-ного спиртового раствора индикатора бромтимолового синего или 10 мл индикатора Андреде.

Состав индикатора Андреде следующий: 32 мл нормального раствора NaOH, 1 г фуксина кислого, 200 мл воды дистиллированной. Полученную смесь настаивают при комнатной температуре в течение 3 сут или при 37°С 24 ч, фильтруют, стерилизуют 3 дня текучим паром.

Среду разливают по 4—5 мл в стерильные пробирки с бродильными трубочками, стерилизуют при 112°С 12 мин или текучим паром 3 дня по 30 мин. Бродильные трубочки можно заменить полужидким (0,5—0,4%) агаром. В этом случае среду без углевода и индикатора стерилизуют при 121°С 15 мин, затем вносят углевод, растворенный в небольшом количестве стерильной дистиллированной воды, и индикатор, кипятят 10—15 мин в водяной бане, разливают в пробирки и стерилизуют при 112°С 12 мин.