Практична частина Визначення гемоглобіну в крові уніфікованим гемоглобінціанідним методом

Практичне значення роботи: кількість кисню є одним з лімітуючих факторів аеробного обміну. 1 г гемоглобіну зв'язує 1,34 мл кисню. Отже, кількість гемоглобіну крові визначає кількість кисню, що доставляється до тканин.

Принцип методу: в основі методу лежить здатність гемоглобіну окиснюваться гексаціонофератом (ІІІ) калію (червоною кров'яною сіллю); забарвлений ціанметгемоглобін (гемоглобінціанід), який утворюється в результаті реакції з ацетонціангідрином, визначається колориметрично.

Матеріали і реактиви:

1. Трансформуючий розчин: ацетонціангідрин – 0,5 мг; калій залізосинєродистий – 0,2 мг; натрій гідрокарбонат – 1,0 г; дистильована вода – до 1л.

2. Калібрувальний розчин гемоглобінціаніду з концентрацією речовин 59,75 мг/100мл.

Хід роботи: У пробірку поміщають до 0,5 мл трансформуючого розчину і додають 0,02 мл крові (розбавлення в 251 раз). Вміст пробірки старанно перемішують і через 10 хв вимірюють екстинкцію на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 500-560 нм (зелений світлофільтр) в кюветі з товщиною шару 1 см проти "холостої" проби (трансформуючий розчин). У таких же умовах вимірюють стандартний розчин.

Розрахунок вмісту гемоглобіну проводять за калібрувальною кривою, побудованою на калібрувальному графіку за стандартним розчином гемоглобінціаніду, або за формулою:

,

де Е_досл – екстинкція дослідної проби;

Е_ст – екстинкція стандартного розчину;

С – концентрація гемоглобінціаніду в стандартному розчині, мг%;

К – коефіцієнт розбавлення крові;

0,001 – коефіцієнт для перерахунку мг\100 мл в г/100мл, вимірюють проти "холостої" проби.

Нормальні величини. У здорових людей концентрація гемоглобіну в крові складає 132-164г/л для чоловіків і 115-145г/л для жінок.

Клініко-діагностичне значення

Зниження концентрації гемоглобіну в крові є основним лабораторним симптомом анемії. Значне зниження концентрації гемоглобіну в крові характерне при гострих кровотечах. Це дослідження встановлює тільки факт наявності недокрів'я. Для уточнення його характеру необхідно досліджувати кількість еритроцитів, кольорового показника, інших розрахункових індексів еритроцитів, морфології еритроцитів.

При фізичних навантаженнях рівень гемоглобіну може підвищуватися (за рахунок згущування крові). Підвищення концентрації гемоглобіну крові у спортсменів може бути також пов'язане з можливим використанням так званого «кривавого допінгу» (внутрішньовенного введення еритроцитів донора або власної крові спортсмена, взятої заздалегідь). Відомий препарат гемопоетин, який підвищує еритропоез в кістковому мозку. Штучне підвищення кількості еритроцитів в крові при тривалих навантаженнях максимальної потужності призводить до значного згущення крові. Це може призвести до змін у реології крові, тромбозів і навіть смерті.

Зробити висновки:

Контрольні питання:

1. Які будова і хімічний склад еритроцитів?

2. Дайте характеристику гемоглобіну, його будові і транспортнії функції.

3. Яка є залежність аеробного обміну від надходження кисню в організм?

4. Розкрийте поняття «кисневий запит», «кисневий борг», «кисневий дефіцит».

5. Вкажіть фактори, які впливають на спорідненість гемоглобіну з киснем.

6. Як впливає гіпоксія на виконання фізичного навантаження?

7. Яке значення має визначення гемоглобіну крові у спортсменів напередодні змагань?

Література:

1. Волков Н.И., Несен Е.Н., Осипенко А.А., Корсун С.Н. Биохимия мышечной деятельности. – Киев: Олимпийская литература, 2000.

2. Ленинджер А. Основы биохимии: В 3 т.: Пер. с англ. — М.: Мир, 1985.

3. Мелихова М.А. Динамика биохимических процессов в организме человека при мышечной деятельности: Учеб. пособие/ ГЦОЛИФК. – М., 1992.

4. Яковлев Н.Н. Химия движения: Молекулярные основы мышечной деятельности. — Л.: Наука, 1983.— 192с.