Лабораторный практикум

Работа 1. Взятие крови у рыб, стабилизация.

Общее количество крови в организме животных составляет приблизительно 4-8% от массы тела. Форменные элементы составляют около 45% объема крови, плазмы – 55%.

Для предотвращения свертывания крови к последней добавляют стабилизаторы, т.е. антикоагулянты. С этой целью используют следующие антикоагулянты (на 10 мл крови):

1. 50 ЕД гепарина медицинского в растворе (в 1 мл раствора 5000 ЕД); 1-2 капли гепарина отмеривают тонкой иглой для внутрикожной туберкулинизации.

2. 3-4 капли 10%-го раствора трилона Б (двунатриевая соль ЭДТА – этилендиаминтетрауксусной кислоты).

3. 30 мг натрия цитрата или 0,3 мл 10%-го раствора.

4. 15 мг натрия (калия) оксалата или 0,15 мл 10%-го раствора.

5. 0,3-0,5 мл 10%-го раствора натрия хлорида.

Чтобы кровь хорошо перемешалась с антикоагулянтом, пробирку закрывают пробкой, 10-15 раз легко переворачивают, не взбалтывая.

Стабилизированную кровь хранят в холодильнике при температуре +4⁰С. Для подсчета форменных элементов кровь пригодна в течение 72 часов, для приготовления мазков – не более 24 часов.

Для получения сыворотки периферическую кровь берут в сухие чистые пробирки и ставят в теплое место для свертывания. Образовавшийся сгусток крови отделяют от стенок пробирки стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 5-10 минут при 2-3 тыс. об/мин. Сыворотку отсасывают пипеткой. Для получения плазмы центрифугируют стабилизированную кровь при тех же условиях.

Реагенты: спирт, антикоагулянт

Оборудование: шприц, рыба

Кровь у рыб берут из сердца, луковицы брюшной аорты, подкожной и хвостовой артерии.

Ход работы. Одним из предложенных методов взять кровь у рыбы из:

- сердца (рис. А) – между грудными плавниками с брюшной стороны обработать спиртом место взятия крови с целью удаления слизи, содержащей тромбокиназу, затем просушить салфеткой. Иглу шприца ввести с брюшной стороны по сагиттальной линии в точке между грудными плавниками, направляя иглу к голове;

- подкожной артерии (рис. Б) – у сеголеток пункцию провести в точке пересечения средней боковой линии и линии, идущей перпендикулярно от анального отверстия; у рыб старших возрастов – в точке пересечения боковой линии и перпендикулярной к ней линии, идущей от заднего конца анального плавника.

Б

А

А – из сердца (1) рыбы, Б – из подкожной артерии (1 — у сеголетков; 2— у карпов старшего возраста)

Рисунок 1. – Взятие крови у рыб

Оформление работы. Зарисуйте схематически места взятия крови у рыб. Запишите возможные к использованию антикоагулянты.

Работа 2. Постановка реакции агглютинации на стекле и в пробирках

Во всех иммунологических реакциях основным компонентом является антиген, который обладает двумя свойствами: 1) способностью вызывать иммунологический процесс в организме; 2) способностью соединяться с антителами в серологических реакциях.

Реакции взаимодействия антитела с антигеном называются серологическими (от лат. serum — сыворотка). Серологические реакции используют: 1) для обнаружения в сыворотке крови антител к тому или иному микробу с помощью известного специфического антигена; 2) для установления вида или типа выделенного микроба по его антигенной структуре с помощью диагностической сыворотки, содержащей известные специфические антитела.

Реакция агглютинации (РА) - обнаруживаемое невооруженным глазом склеивание и выпадение в осадок микробных тел при взаимодействии их со специфическими антителами.

Положительный результат реакции агглютинации характеризуется образованием на дне пробирки осадка с выраженным просветлением надосадочной жидкости. Осадок на дне пробирки, образовавшийся в результате склеивания микробных тел, называется агглютинатом.

Титр сыворотки - последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация