Практическая работа № 6 методы биологических исследований, основанные на использовании антител

Контрольные вопросы:

1. Получение сывороток для иммунологических реакций и методы улучшения их качества.

2. Метод получения гибридом, пригодных для продукции моноклональных антител.

3. Реакция агглютинации и преципитации. Гемагглютинация, разновидности.

4. Иммуноэлектрофорез, разновидности.

5. Методы с использованием конъюгированных иммуноглобулинов: иммунофлюоресценция, иммуноферментный и радиоиммунологические анализы, иммуноблотинг.

6. Реакции с участием комплемента – реакции связывания комплемента, локального гемолиза, бактериолиза.

7. Реакции опсонизации и нейтрализации.

Практикум. Задание 1. Метод получения моноклональных антител.

Составьте схему получения гибридом, пригодных для получения моноклональных антител.

Задание 2. Исследование взаимодействия АГ-АТ.

Два уровня исследования взаимодействия АГ-АТ. Заполните таблицу, характеризующую основные серологические методы, используемые в биохимической диагностике.

Метод	Принцип метода	Схема постановки	Использование
Первичный – констатация самого факта образования ИК (максимальная чувствительность):
Иммунофлюорисцентный
Радиоиммунный
Иммуноферментный анализа
Иммуноблоттинг
2) Вторичный –констатация внешнего проявления:
Агглютинация
Преципитация
Связывание комплемента

Решить ситуационные задачи

Задача №1. Лабораторная диагностика трихинеллеза связана с двумя патогенетическим фазами заболевания – миграцией личинок и концентрацией личинок в мышцах. Обе эти фазы заболевания сопровождаются выработкой специфических антител, зависящей от стадии развития возбудителя, интенсивности инвазии, иммунного статуса инвазированного. В ранний период развития инвазии (до 1 мес.) в циркулирующей крови слабая концентрация специфических антител, что обусловлено преобладанием развития местного иммунного ответа хозяина и иммунносупрессивной активностью кишечных паразитов. В связи с поступлением в циркуляцию антигенов мигрирующих личинок трихинелл и усилением активности иммунокомпетентных органов затем происходит выработка и накопление специфических антител, которые выявляются серологическими реакциями. Поэтому серодиагностика трихинеллеза носит ретроспективный характер. Установлению диагноза помагает серологическое исследование с помощью реакций РНГА и ИФА. Оба метода диагностики позволяют выявлять IgG, IgM к антигенам трихинелл. При этом, в ранней стадии развития инвазии, сопровождающейся выработкой IgM, более эффективна РНГА, а в поздней – эффективность обеих реакций не различается [7]. При кишечной и ранней миграционной фазах (до 10 дней) инвазии антитела не выявляются.

Объясните принцип постановки реакции РНГА и ИФА для диагностики трихинеллеза.

Задача №2. Лекарственные препараты, созданные на основе моноклональных антител (МАТ), используются при лечении тяжелых заболеваний с прогрессирующим течением онкологического профиля, аутоиммунной природы, аллергических заболеваний, отторжения трансплантата (лечение и профилактика). Преимущественная частота использования МАТ в онкологии [2]. Механизм действия МАТ на клетки-мишени включает иммуноопосредованную цитотоксичность (антителозависимую и комплементзависимую), стимуляцию фагоцитоза опухолевых клеток, блокаду соответствующих рецепторов, способность непосредственно индуцировать программу апоптоза, тормозить рост опухолей за счет блокады образования новых сосудов и др. Два типа МАТ используют в терапии опухолей: простые (неконъюгированные АТ), несвязанные ни с какими цитотоксическими веществами; конъюгированные, лечебный эффект которых обусловлен присоединенными веществами к антителам (радиоактивными частицами, цитостатиками, токсинами). Предложите схему получения МАТ: 1) IgG1, специфичные к ФНОα, 2) антител к CD20, экспрессированному на В-лимфоците.