Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
рабочая тетрадь по токсикологии 90 %.docx
Скачиваний:
6
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
407.87 Кб
Скачать

4. Изолирование токсических веществ из биологического материала диализом.

Диализ - метод удаления низкомолекулярных неэлектролитов и электролитов из коллоидных растворов высокомолекулярных веществ, основанный на свойствах некоторых мембран пропускать молекулы и ионы, задерживая, коллоидные частицы и макромолекулы.

В ветеринарной практике диализ наиболее широко используют для определения нитратов и нитритов в различных биологических объектах.

Исследуемый объект при этом смешивается с водой до образования густой кашицы, способной фильтроваться. Смесь через 1-2 часа фильтруют. Диализ проводят 2-3 раза по 4-6 часов. Слитые вместе диализаты упаривают на водяной бане до небольшого объема и исследуют одним из подходящих для конкретной задачи способов.

Жидкость, подвергаемую диализу, отделяют от чистого растворителя соответствующей мембраной, через которую молекулы и ионы диффундируют в растворитель и, при достаточно частой смене растворителя, почти целиком удаляются из диализируемой жидкости.

Способы очистки экстрактов и подготовки их к идентификации токсических веществ.

  1. Экстракция и реэкстракция.

  2. Вымораживание.

  3. Осаждение.

  4. Хроматографическая очистка.

В большинстве методик используется комбинация нескольких способов очистки экстрактов, т. к. ни один из указанных методов не дает возможности получить достаточно очищенныйэкстракт, пригодный для идентификации яда большинством известных способов.

Очистка путём экстракции и реэкстракиии.

Экстракция - процесс переноса растворенного вещества из одной жидкой фазы в другую (несмешивающуюся с ней).

Экстрагент - жидкая фаза (органический растворитель, смесь растворителей или раствор экстрагирующего реагента), которую используют для экстракции (извлечения) вещества из другой фазы.

Экстракты - отделенная фаза (обычно органическая), содержащаявещество, экстрагированное из другой фазы.

Реэкстракция - процесс извлечения яда из экстракта.

Промывка - процесс удаления примесей из отдельной фазы, содержащей основное вещество (т.е. из экстракта или реэкстракта).

Очистка вымораживанием. Путём охлаждения удаляют из экстрактов жиры, липиды и некоторые пигменты. Для этого используют смесь полярных растворителей (спирт, ацетон) с добавлением воды (от 5 до 50%). Экстракт в этой фазе охлаждают в испарительной камере холодильника, при температуре от -5°С до -20°С. Жиры при охлаждении переходят в твердое состояние.

Очистка осаждением. Некоторые коэкстрактивные вещества можно выделить из раствора с помощью добавления специальных реагентов. Особенно эффективен этот способ в сочетании с охлаждением анализируемого экстракта.

Для осаждения коэкстрактивных веществ из экстрактов используют и другие реагенты (аммония молибдат, трихлоруксусную кислоту и др.).

Очистка на хроматографических колонках. Этот способ основан на хроматографическом принципе разделения веществ. Обычно для этих целей используют жидкостную хроматографию на колонке. При этом используют стеклянные колонки диаметром 1-3 см и длиной до 30 см. В качестве адсорбентов используют окись алюминия, силикагель, активированный уголь и др. Сконцентрированный экстракт заливают в подготовленную колонку и элюируют препарат органическим растворителем (или смесью растворителей).