Определение нитратов и нитритов в различных объектах.

1. Качественная проба с дифениламином на обнаружение нитратов в растительных продуктах.

А) Обнаружение нитратов в соке растения:

Материальное оснащение:

1. Проба сока для ХТА: порцию растительного сырья измельчить на терке или с помощью ножниц до размеров 0,5-1 см; из 10 г измельченного сырья отжать 1мл сока для анализа.

2. Стеклянная пипетка - 2 шт.

3. Фарфоровая чашка - 1шт.

4. Стеклянная палочка -1шт.

5. Пинцет -1шт.

6.Дифениламин кристаллический - несколько кристаллов

7.Серная кислота –10 капель

Ход опыта

В фарфоровую чашку налить 10 капель концентрированной серной кислоты, внести туда 1 кристалл дифениламина, тщательно растереть содержимое чашки, прилить в чашку 1-2 капли испытуемого сока.

Оценка результата:

Окраска развивается в течении 20-30 секунд. В зависимости от концентрации нитратов интенсивность окраски меняется от медно-голубой до интенсивно синей.

Чувствительность метода (минимальное количество нитратов, которое можно обнаружить в пробе) = 100мг/кг

Б) Обнаружение нитратов в корнеплодах свёклы, моркови, картофеля

Материальное оснащение: свежий срез свеклы, чашка петри (или фарфоровая чашка), пинцет, пипетка, серная кислота концентрированная, дифениламин кристаллический.

Ход опыта

1.На поверхность среза свеклы нанести пинцетом несколько кристаллов дифениламина.

2.Смазать кристаллы несколькими каплями концентрированной серной кислоты.

Оценка результата:

интенсивное синее окрашивание среза свеклы указывает на большое содержание нитратом (больше 100мг/кг)

2. Качественная проба с реактивом Грисса на обнаружение нитритов в пробах патологического материала.

Материальное оснащение: 1мл испытуемого диализата.

Диализат готовится по схеме:

10г измельченного патологического материала залить 100мл дистилированной воды, экстрагировать в течение часа периодически встряхивая.

Профильтровать водный экстракт. Если он окрашен, то обесцветить его окисью алюминия (0,1г на 100мл); Отстоять 2 часа, слить надосадочную жидкость.

Для осаждения белков в экстракте использовать смесь, состоящую из 10мл 0,5 % NaOH и 25 мл 5% ZnSO4. К 30 мл надосадочной жидкости (стадия1.2) прилить 20мл смеси для осаждения белка; профильтровать. Полученный диализат использовать для ХТА. Реактив Грисса (1% раствор дифениламина в серной кислоте) –10мл. Пробирка на 10мл.

Ход работы

В пробирку налить 1 мл диализата, сторожно по стенке прилить 1 мл реактива Грисса.

Оценка результата:

Красное и темно-красное окрашивание является сигналом на присутствие токсической дозы нитритов.

Отравления животных мочевиной

Мочевина (карбамид): СО(NH₂)₂ , белый кристаллический гигроскопический порошок.

В животноводстве синтетическая мочевина применяется в качестве кормовой добавки жвачным животных в дозе 0,25 г/1 кг, а также широко применяется как азотное удобрение: возможно случайное поедание удобрения.

При расщеплении мочевины в рубце животных выделяется аммиак и углекислота. Аммиак используется микрофлорой рубца для синтеза микробного белка, который в сычуге и в тонком кишечнике всасывается и используется в организме жвачных для синтеза собственных белков, т.е. пополняет пластический материал. При нормальном количестве мочевины в рационе жвачных неиспользованный в синтезе белка аммиак всасывается в кровь, поступает в печень, где инактивируется: превращается в эндогенную мочевину, которая удаляется из организма с мочой.

При избытке мочевины в корме возникает отравление.

Токсикодинамика

В корме содержащемся в рубце находится 10-30 мг % аммиака. При 100-125 мг % аммиака в рубце происходит смертельное отравление.

Причиной отравления при избыточном введении мочевины является накопление двух метаболитов мочевины: аммиака (NH₃) и карбамината аммония (NH₂COONH₂).

Карбонат аммония образуется только при взаимодействии аммиака и диоксида углерода в присутствии воды: 2NH3 + С02 + Н20 = (NH4)2C03.

Сухие же газы реагируют между собой с образованием в обычных условиях карбамината аммония —соли карбаминовой кислоты NH2COOH: 2NH3 + C02=(NH2COO)NH4. карбамат - аммониевая соль карбаминовой кислоты NH2COONH4,

Избыток аммиака резко повышает щелочность содержимого рубца: при рН=8,0 движение рубца замедляется, наступает атония и тимпания рубца.

В крови и тканях увеличивается насыщение аммиаком, тормозится окислительно-восстановительные процессы, блокируется синтез макроэргов и биологически-активных веществ, особенно медиаторов.

В результате патохимических изменений нарушаются функции жизненно важных органов, в первую очередь – центральной нервной системы. Возникает кратковременное возбуждение ЦНС с последующим параличом сосудодвигательного и дыхательного центров.

Клинические признаки

Острое отравление.

• Через 0,5-1 часа после приема внутрь токсической дозы мочевины появляются симптомы возбуждения ЦНС: мышечная дрожь, тетанические стрихниноподобные судороги, повышенная чувствительность кожи (гиперестезия), пугливость; животное беспокойно, учащается дефекация и мочеиспускание; регистрируются коликоподобные при-ступы, стоны.

• Во время судороги конечности вытянуты, дыхание и пульс учащены. Наблюдается рвота с резким запахом аммиака.

• Стадия возбуждения постепенно переходит в коматозное состояние:

• жвачка прекращается (тимпания);

• температура тела нормальная.

• Гибель наступает в течение 1-3 часов в результате паралича дыхательного центра, отека легких и асфиксии.

Хроническое отравление.

• Длительное нарушение окислительно-восстановительных процессов ведут к белковой и жировой дистрофии, нарушению важнейших функций, рождению нежизнеспособного молодняка. Для диагностики хронического отравления проводить анализ крови на содержание аммиака, мочевины, кетоновых тел, активности трансаминаз : эти показатели увеличиваются выше нормы.

Лечение.

• . Для нейтрализации аммиака ( создает щелочную реакцию в рубце) провести промывание желудка водой, а затем ввести внутрь 0,5-1 л 1% р-ра уксусной к-ты, молочной кислоты (10 мл на 1 литр воды), молочной сыворотки, кислого молока.

• Вместо уксусной кислоты можно использовать выпаивание 4-5 л кислого молока или молочной сыворотки.

Для замедления расщепления мочевины в рубец через стенку ввести раствор формальдегида в дозе 0,3 мл формалина на 1 кг. Рассчитанный объём растворить в 1 л воды и ввести шприцем Жанэ.

Для стимуляции метаболизма яда усиления функция функций печени, сердца, мозга ввести глюкозу с кофеином.

Для предотвращения судорог ввести седативные средства :магния сульфат, клоралгидрат.

Профилактика

• Соблюдать норму добавления в корм мочевины согласно инструкции ( в концентратные смеси –не более 2%).

• Суточную норму перемешать с кормом и давать в три приема.

• Не допускать выпаивания мочевины в виде раствора или с

• пойлом.

• Введение мочевины в рацион начинать с минимальных доз ( 1/5 суточной дозы) и в течение 2-х недель довести до оптимальной дозы .

• Не допускать резких перерывов в скармливании мочевины.

• Не вводить мочевину в корм животным с заболеванием печени, истощенным животным , молодняку до 6 месяцев.

Обнаружение мочевины в пробе корма.

Материальное оснащение: водная вытяжка из корма, азотная кислота, часовое стекло, глазные пипетки 2 шт.

Ход опыта. К капле водной вытяжки из корма прибавить 1-2 кап­ли концентрированной азотной кислоты.

Оценка реакции:

• При наличии карбамида вы­кристаллизовывается его азотная соль в виде шестигранных или ром­бических пластинок, лежащих преимущественно кучками или черепицеообразно.