Техника и механизм окраски по Грамму (дифференцировка грам-положительных и грамотрицательных бактерий в зависимости от строения клеточной стенки)
Этапы окраски по Граму |
Происходящие при окраске процессы |
Микроскопическая картинка |
1. На мазок наносят краситель генцианвиолет (кристаллический фиолетовый) на 1-2 мин
|
Генцианвиолет проникает в клеточную стенку и фиксируется в пептидогликане |
|
2. Генцианвиолет сливают, а на мазок наносят раствор Люголя - до почернения мазка (10 - 20 сек) |
Молекулы йода способствуют созданию прочной структуры генцианвиолет-пептидогликан |
|
3. Действие дифференцирующей жидкости - 96 этанол - мазок промывают до прекращения отхождения струек синей краски.
4. Мазок промывают водой. |
Спирт вымывает генцианвиолет из тонкослойного пептидогликана грам- бактерий, обесцвечивая их |
|
5. На мазок наносят раствор фуксина на 2-3 мин |
Фуксин проникает в обесцвеченные спиртом грам- бактерии, окрашивая их в красный цвет. Цвет грам+ бактерий не изменяется, так как их пептидогликан прочно удерживает генцианвиолет |
|
Таблица 5
Техника и механизм окраски по Цилю-Нильссену (выявление кислотоустойчивости бактерий)
Этапы окраски |
Происходящие при окраске процессы |
Микроскопическая картинка |
1. На мазок наносят карболовый фуксин Циля и прогревают над пламенем |
действие фенола и высокой температуры способствует проникновению фуксина даже в оболочки кислотоустойчивых микробов |
|
2. Действие дифференцирующей жидкости -мазок промывают 5 % серной кислотой - 20 секунд, затем нейтрализуют кислоту промыванием водой. |
Фуксин вымывается из клеточной стенки кислотоподатливых бактерий - они обесцвечиваются. Кислотоустойчивые сохраняют окраску |
|
3. Мазок докрашивают метиленовым синим |
Метиленовый синий проникает в клеточные оболочки кислотоподатливых бактерий, придавая им голубую окраску
|
|
В заключении по обычной световой микроскопии никогда не указывают принадлежность к виду или роду микробов, так как морфологический критерий наименее специфичный у микроорганизмов, а приводят описание морфологии микробов, указывая их форму, размеры, расположение друг относительно друга и тинкториальные свойства. Например: в препарате обнаружены бесформенные скопления грам+ кокков (стафилококков). Или: в мазке обнаружены клеточный детрит, обильная палочковидная грамотрицательная флора. Или: в мазке обнаружены слабо воспринимающие окраску спирохеты (12 равномерных завитков, концы заострены). Или: в мазке обнаружены грам+ палочки, располагающиеся парами, под углом друг к другу (в виде латинской буквы V), с булавовидными утолщениями на концах.