3. Молекулярно-генетический метод.

Это методы изучения ДНК.

Этапы анализа ДНК:

1. Выделение ДНК из клеток, содержащих ядра (крови, тканей, спермы, костей, волос и др. биологических материалов), включая трупный материал и ископаемые останки;

2. Обнаружение и размножение (копирование) небольшого интересующего фрагмента из тотальной ДНК методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР);

3. Анализ последовательности нуклеотидов интересующего фрагмента ДНК: регистрация результатов ПЦР обычно с помощью электрофореза в агарозном геле.

Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - метод амплификации ДНК т уйго, с помощью которого в течение нескольких часов можно обнаружить и копировать интересующий фрагмент ДНК размером от 80 до 3000 п.н.

Исходные компоненты ПЦР:

1. ДНК-матрица (тотальная ДНК);

2. Праймеры (однонитевые синтетические фрагменты ДНК размером 20-30 нуклеотидов), строго комплементарные правой и левой границам интересующего фрагмента ДНК).

3. Нуклеотиды. являющиеся материалом для синтеза новых комплементарных цепей ДНК);

4. Фермент - ДНК-полимераза. катализирующий удлинение цепей праймеров путем последовательного присоединения нуклеотидов к растущей цепи синтезируемой ДНК.

ПЦР - исследование включает 30 циклов амплификации, в состав каждого цикла входят 3 стадии:

1. Денатурация ДНК (расплетение двойной спирали, разрыв водородных связей между комплементарными нуклеотидами) (при температуре 93-95°С в течение I мин).

2. Отжиг (присоединение) праймеров (50-60°С, 1 мин).

3. Комплементарное достраивание цепей ДНК (72°С, 1 мин).

К концу ПЦР происходит накопление нужного участка ДНК до 2" фрагментов, где п-число циклов амплификации. Этого количества достаточно для точной детекции этого фрагмента методом электрофореза.

4. Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя

Практическая работа

Лабораторная работа №1 Применение закона Харди-Вайнберга для расчета частот генотипов, аллелей и характеристики генетической структуры популяции (группы), используя тест на праворукость и леворукость

Запомните! Частоты аллелей и генотипов в уравнении Харди-Вайнберга выражаем только в долях от единицы!

1. Используя тесты на праворукость и леворукость, составляем таблицу и определяем свой генотип (табл. 1.1).

Л'

Таблица 1.1

№ теста	Аплодисменты	Поза «Наполеона»	Скрещенные пальцы	Пр рука	Левая рука
1	пр	лев Т1	лев Ж	1	2
2	пр Г\	лев Ч	лев _1-	1	2
3	пр (}\	лен V-	лев \м)	1	2
Сумма				3	6

Примечание, гомозиготный генотип уегнмпплнннсгся в случае преобладания одной из рук более, чем в 2 раза (т.е. при соотношениях 2\7, 1\; 0\9) I) остальных случаях устанавливается гетерозиготное состояние.

Заключение: соотношение 3\6, следовательно, генотип Аа - гетерозиготный 2. Составляем суммарную таблицу I пютипов всех студентов группы (табл. 1.2):

Таблица 1.2

Наблюдаемые чистоты генотипов и аллелей

№ н/п	Генотип
1	АА
2	Аа
3	аа
4	Аа
5 .	Да

3. Определяем наблюдаемые частоты генотипов и аллелей (табл. 1.3):

Таблица 1.3