1.Посев штрихом или разливом на твердую среду

Существует много методов посева штрихом в чашки с твердыми средами («штрихованные чашки»), но лишь один из них (рис.2) почти всегда дает хорошо изоли­рованные колонии даже при отсутствии навыков у экс­периментатора. Кроме того, можно наливать разведен­ные растворы смешанной культуры на поверхность твер­дых сред в чашках. При работе с анаэробами «штрихованные чашки» или чашки с внесенной в них жидкой культурой в атмосфере воздуха инкубируют затем в анаэростате. Для анаэробов необходимы свежеприготовленные среды, и посев штрихом следует проводить в течение первых 4 ч после их автоклавирования, чтобы избежать накоп­ления растворенного кислорода.

Рис.2. Удобный метод посева штрихом в чашки для получения отдельных колоний. А. Для маркировки на обратной стороне чашки Петри карандашом наносят букву Т, разделяющую дно на 3 сектора. Б. Петлей с культурой зигзагом наносят штрихи на поверхности агара в секторе 1, как показано на рисунке. Для этого крышку чашки сначала приподни­мают, а после нанесения штриха сразу закрывают. Петлю стерилизуют в пламе­ни и дают ей остыть (15 с). В. Проводят петлей по по­верхности среды в секторе 1, как показано на рисунке, и затем немедленно наносят ею зигзагом штрихи на по­верхности среды в секторе 2. Прогревают петлю в пла­мени и дают ей остыть. Г. Проводят петлей по поверхности среды в секторе 2, как показано, и затем наносят ею зигзагом штрихи на поверхности среды в секторе 3. Д. Инкубируют опрокинутые вверх дном чашки, как показано на рисунке, для того чтобы конденсирующаяся во­да с крышки не попала на поверхность агара. В секторе 1 вырастает большое чис­ло колоний, тогда как в сек­торах 2 и 3 появляются от­дельные хорошо изолирован­ные колонии.

Посев на плотные среды в чашках Петри осущест­вляют различными методами в зависимости от необхо­димости вырастить микроорганизмы в толще среды или на ее поверхности:

а) для глубинного посева (в толще среды) используют обычно мерные количества плотной среды, заготовленные в пробирках по 10—15 мл. Культуру вно­сят в пробирки с расплавленным и охлажденным до 40—45°С агаром, а затем заливают смесь в чашку Пет­ри. Возможен и другой способ глубинного посева: взвесь микроорганизмов вносят непосредственно в стерильную чашку Петри на дно, слегка, приоткрыв крышку, а затем заливают ее расплавленным и охлажденным агаром. Среду с культурой тщательно перемешивают круговыми движениями чашки, не поднимая ее с поверхности стола, и оставляют чашку на столе до застывания агара;

б) для поверхностного роста исследуемый материал наносят на поверхность уже застывшей среды. Распределение материала по пластинке агара можно выполнить с помощью шпателя или бактериологической петли. При посеве шпателем (стеклянной палочкой, согнутой в виде треугольника) чашка с застывшей средой находится на поверхности стола. Левой рукой слегка приоткрывают крышку, а правой вносят на поверхность агара определенное количество (петлю, каплю или определенный объем) культуры. Круговыми движениями шпателя распределяют культуру по всей поверхности среды. Затем переносят шпателем культуру в следующую чашку и таким образом последовательно в 3-5 чашек. При использовании для посева бак­териологической петли осуществляют посев штриховым способом. Чашку Петри кладут на стол дном кверху и левой рукой поднимают только ее основание со средой; держат дно чашки в руке вертикально и осторожно, не взрыхляя среды, наносит культуру петлей зигзагообраз­ными движениями (штрихом).