
- •Кафедра клинической лабораторной диагностики Иммунологические методы диагностики заболеваний.
- •Гомель, 2004 год
- •Практические навыки:
- •Реакция агглютинации (ра)
- •Развернутая ра для выявления антител в исследуемой сыворотке крови
- •Реакция Кастеллани
- •Ориентировочная ра для идентификации микроба
- •Реакция непрямой гемагглютинации (рнга)
- •Реакция преципитации
- •Реакция иммунного лизиса
- •Реакция связывания комплемента (рск)
- •Метод флюоресцирующих антител (мфа)
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Радиоиммунный анализ (риа)
- •Методические подходы к диагностике аллергических заболеваний
- •Аллергические пробы
- •Кожные пробы с инфекционными аллергенами
- •Источник уф-излучения
Аллергические пробы
Аллергия - особое иммунологическое состояние организма, которое отличается повышенной чувствительностью к антигенам и сопровождается иммунной травмой клеток тканей и органов. Атлергические состояния специфичны, нередко они сохраняются всю жизнь, поскольку поддерживаются механизмами иммунологической памяти и периодическими контактами с антигеном.
В зависимости от того, какие факторы иммунной системы участвуют в формировании повышенной чувствительности, различают следующие типы аллергии; В-зависимая, Т-зависимая и смешанная.
В-зависимая аллергия связана с накоплением в организме аллергических антител, формируется не ранее чем через 9-10 дней после контакта с антигеном, местная реакция на аллерген появляется через 15-30 мин. В связи с быстрым развитием реакций В-зависимые аллергии часто называют гиперчувствительностью немедленного типа. К патологии этого типа относятся пыльцевая аллергия (полинозы), пищевая аллергия, бронхиальная астма, отек Квинке, анафилактические аллергии и др.
Т-зависнмая аллергия обусловлена наличием Т-лимфоцитов. Минимальный срок для формирования сенсибилизации при этом 3-4 дня, однако местная реакция на аллерген развивается не сразу, а через 24-48 ч (гиперчувствнительность замедленного типа). К этому типу повышенной чувствительности относятся инфекционная и химическая аллергии, аутоаллергия.
Смешанная аллергия, с преобладанием гуморального или клеточного компонента, обычно является результатом хронических или рецидивируюших аллергических процессов.
С помощью проб можно расшифровать этиологию аллергии, что имеет важное значение для лечения многих инфекционных и неинфекционных заболеваний, позволяет предупредить опасные аллергические осложнения от применения лекарств и сывороточных препаратов. Покраснение в месте введения аллергена в кожу свидетельствует о состоянии повышенной иммунологической чувствительности (сенсибилизации) организма. Диагностические аллергены условно делят на инфекционные и неинфекционные. Инфекционные аллергены, как правило, представляют собой очищенные фильтраты или экстракты из микроорганизмов. Реже используются нативные аллергены, содержащие убитые тела микробов и продукты метаболизма. Неинфекционные аллергены представлены в виде экстрактов пыльцы различных растений, экстрактов из домашней, гостиничной и библиотечной пыли, экстрактов из перхоти, шерсти, волос различных животных, пищевых аллергенов.
Кожные пробы с инфекционными аллергенами
Состояние повышенной чувствительности может развиваться к патогенным, условно патогенным и непатогенным микроорганизмам. Сенсибилизация организма к патогенным микроорганизмам формируется после перенесенных инфекционных заболеваний. Особенно хорошо выражена аллергическая перестройка после таких инфекций, как бруцеллез, туберкулез, туляремия, сап, мелоидоз, сибирская язва, орнитоз, актиномикоз, дерматомикозы. В связи с этим для диагностики таких заболеваний применяют постановку кожных аллергических проб (КАП) с аллергенами, носящими соответственно названия бруцеллин, тулярин, маллеин, уайтморин, антраксин и др. После иммунизации некоторыми живыми вакцинами, помимо иммунитета, приобретается также и состояние аллергии к возбудителям туберкулеза, туляремии, бруцеллеза, оспы, кори и др.
Аллергия к условно патогенным и непатогенным микробам является важным, а иногда ведущим звеном в патогенезе разнообразных хронических заболеваний дыхательных путей, носоглотки, желудочно-кишечного тракта, почек, печени, кожи, суставов. Для установления вида этих аллергизирующих микроорганизмов также применяют постановку кожных проб с аллергенами гемолитического стрептококка, стафилококков, пневмококка, нейссерии катаралис, кишечной палочки, протеев мирабилис и моргани, синегнойной палочки и др. Положительный результат аллергодиагностики помогает начать этиотропное лечение, направленное на ликвидацию инфекционного очага.
Инфекционные диагностические аллергены вводят чаще всего внутрикожно, реже накожно путем втирания в царапины (скарификация). При внутрикожном способе в среднюю треть ладонной поверхности предплечья специальной иглой вводят обычно 0,1 мл аллергена. Через 24-48 ч учитывают наличие и размеры эритемы, инфильтрата и болезненность в месте инъекции. Обычно положительной считают реакцию с диаметром папулы не менее 5 мм.
В плановом порядке ставят пробы с туберкулином для выявления контингентов, подлежащих иммунизации вакциной БЦЖ, ибо между противотуберкулезным иммунитетом и аллергией имеется определенный параллелизм. Поэтому отрицательная аллергическая проба на туберкулин свидетельствует об отсутствии иммунитета. Для массовой туберкулинодиагностики применяют внутрикожную пробу Манту с аллергенами ППД (сухой очищенный туберкулин) или ППД-Л (очищенный туберкулин в стандартном разведении). Туберкулиновую реакцию лучше учитывать через 72 ч, когда стихают явления неспецифического воспаления, а папула достигает максимальной величины. Размер папулы определяют прозрачной миллиметровой линейкой по диаметру. Если размер инфильтрата до 1 мм - реакция Манту отрицательная; 2-4 мм - сомнительная; 5 мм и более - положительная; более 20 мм - гиперергическая. Лица с отрицательной пробой Манту подлежат обязательной вакцинации БЦЖ, с гиперергической реакцией - нуждаются в наблюдении фтизиатра.
Инкубация
и промывка
АТ
или АГ иммобилизированный на носителе
Внесение пробы
Внесение
коньюгата с пероксидазой, затем
субстратного раствора
Остановка реакции
Промывка
Измерение поглощения
С
Инкубация
и промывка
Инкубация
и промывка.
Образование
иммунных комплексов.