Реакция Кастеллани

Некоторые микробы помимо специфических видовых антигенов содержат также и групповые антигены. При иммунизации организм отвечает на них выработкой соответствующих видовых и групповых антител. Поэтому сыворотка, содержащая групповые агглютинины, агглютинирует родственные между собой микробные виды, имеющие общий групповой антиген.

Метод Кастеллани основан на удалении из иммунной сыворотки антител, реагирующих с групповыми антигенами. Насыщение сыворотки культурой гомологичного (специфичного) микроба ведет к полному удалению как специфических, так и групповых антител. Однако насыщение сыворотки культурой гетерологичного (родственного) микроба ведет к удалению только групповых антител, и она будет агглютинировать только гомологичные микробы (табл.8).

Таблица 8 Использование реакции Кастеллани для серологической диагностики брюшного тифа и паратифов
Вид микробов, которые агглютинирует испытуемая сыворотка больного Агглютинация исследуемой сыворотки до адсорбции агглютининов		Агглютинация исследуемой сыворотки после адсорбции агглютининов
		взвесью S.typhi	взвесью S.рaratyphi А*	Взвесью S. paratyphi В
S.paratyphi А (антигены 1,2.12)	+	+		+
S.paratyphi В (антигены 1,4,12)	+	+	-	-
S.typhi (антигены 5,9,12)	+	-	-	+
*Можно предположить, что заболевание вызвано S.paratyphi A.

Делают разведения сыворотки 1:100. Затем готовят антигены, т.е. взвесь суточных агаровых культур разных видов микробов, которые агглютинируются этой сывороткой. Взвеси центрифугируют при 3000 об/мин, к осадку добавляют по 2 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:100. Опытным путем было установлено, что для истощения 1 мл иммунной сыворотки 1:100 надо брать осадок микробной взвеси, полученной из 5-6 пробирок со скошенным агаром. Содержимое пробирок перемешивают, помещают на 2 ч в термостат, а затем на 18 ч в холодильник (4°С). После этого взвесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость (истощенная сыворотка) испытывают в развернутой РА с теми видами микробов, которые агглютинировались ею до насыщения.

Ориентировочная ра для идентификации микроба

Реакция служит для предварительного определения вида микроба. На предметное стекло наносят каплю узкоспецифичной адсорбированной сыворотки (т.е. сыворотку, содержащую только специфические антитела). Сыворотку наносят в разведении 1:10 и рядом - каплю физиологического раствора (контроль). Исследуемую культуру микроба петлей вносят в обе капли и размешивают. Через 2-4 мин учитывают результат. При положительной реакции (соответствие исследуемой культуры диагностической сыворотке) наблюдается скучивание бактерий в виде хлопьев на фоне прозрачной жидкости. В контроле - равномерная муть. Реакцию ставят перед постановкой развернутой РА для идентификации микроба.