Среды для разбавления спермы (г-ц-ж)

Вещества	Для спермы
	быка	барана	Жеребца
Вода дистиллированная, мл	100	100	100
Глюкоза мед. безводная, г	3,0	0,8	7,0
Натрий лимоннокислый, г	1,4	2,8	-
Желток куриного яйца, мл	20	20	0,8
Спермосан, тыс. ЕД.	75	75	25

4. Методы хранения и упаковки спермы производителей

Длительное хранение спермы

Различают два вида анабиоза – естественный – путем создания повышенного осмотического давления, кислой реакции (рН –6,7-6,8) понижении температуры.

• искусственный – за счет резкого охлаждения.

• В 1902 г. Бахметьев – впервые научно обосновал теорию анабиоза.

• В 1907 г. Иванов применил низкие температуры близкие к 0⁰

Существует два способа хранения спермы:

• при 0 – объем снижается в 10 раз но оплодотворяемость сохраняется не боле 3-4 дня.

• глубокое замораживание спермы (наиболее усовершенствованный метод)

Преимущества:

а) – долго храня сперму, можно в течение года равномерно использовать быков-производителей, не допускать их перегрузки.

б) – используется индивидуальный подбор пар.

в) – сперма используется на 100 %, а в предыдущем только 50 %.

г) – проверка производителя по качеству потомства.

д) – создает возможность для крупномасштабной селекции.

е) – позволяет создать заносы спермы.

ё) – позволяет создавать новые породы, линии.

Ив. Васильевич Смирнов под руководством Милованова В.К. впервые заморозил сперму до – 79 ⁰С выдерживал пакеты со спермой на поверхности твердой двуокиси углерода (сухого льда). Автор впервые получил потомство при использовании замороженной спермы кролика, барана, быка.

В 1948 г. группа биологов из Кембриджа (Англия) обнаружила криозащитные свойства глицерина.

В 1952 году для глубокого замораживания предложены О₂ и N. Однако от использования кислорода отказались – т.к. он является активным окислителем. В нашей практике применяется жидкий азот.

В практике используют следующие виды расфасовки спермы:

- гранулы: облицованные;

- не облицованные.

- соломинки (пайеты).

Для глубокого замораживания в гранулах используют свежеполученную сперму, (быка) которая имеет активность не менее 8, концентрацию – 0,8 млрд. в мл.

Разбавляют синтетической средой:

Вода дистиллированная, мл. – 100

Лактоза или сахароза, г. – 11,5

Желток куриного яйца, мл. – 20

Глицерина, мл – 5,0

Спермосан, тыс. ЕД – 75

Среда подогрета до t –36 ⁰С

Затем сперму эквилибрируют постепенно охлаждают 30 мин – до комнатной t -+ 18 ⁰С , 4-5 часов до t -+ 5-0 ⁰С. Это необходимо чтобы сперма адаптировалась к условиям внешней среды. Замораживание идет двух моментно. Сначала используют Г-Ц-Ж, а через 3 часа в процессе эквилибрации подслаиваем тотже Г-Ц-Ж + глицерин. После эквилибрации (уравновешивания) проверяют активность спермиев (не ниже 7 баллов).

Для замораживания в гранулах применяют термоизоляционный сосуд из нержавеющей стали и фторопластовые пластины с лунками по 0,2 и 0,5 мл.

- в канистры и сосуд Дьюара.

Облицованные гранулы – для этого используют тонкостенную полимерную трубку диаметром 3,8-4 мм.

Её стерилизуют УФО. Заполненную спермой трубку подводят к сварочному аппарату, нарезают, маркируют (объем 0,25-0,33 мл).

Наиболее перспективная технология замораживания и фасовки спермы разработана в 1975 году Л.Кассу (Франция), который предложил применять полипропиленовые соломинки (пайетты) емкостью по 0,2 –0,4 мл.

Синтетическая среда – Лецифос 271 двух фракций

1. Вначале берут фракцию I (состоянию из лецифос 271, 3 % глицерина, 10 % желтка) эквилибрируют.

2. Фракция II – лецифос – 271, 11% глицерина, 10 – желтка глубокая заморозка в жидком азоте при - 196 ⁰С. После заморозки пайетты собирают в габлеты, а затем в канистры.

Замораживание спермы производителей других с.-х. животных

- Баранов. Разработал Лапырин (совместно с Логиновой, Кузнецовым) присвоено звание Героя Соц. Труда. Технология в основном та, что и для быков. Особенность: более высокое осмотическое давление. Состав разбавителя: Н₂О дист. –100, цитрат Nа –2, глюкоза – 6,0, желток– 20 мл, глицерин–9 мл.

Активность после размораживания – 5 баллов, оплодотворяемость невысокая.

• Жеребцов – в 1956 г. профессор Канкин и аспирантка Ильинская. В 1968 – США. Наиболее удачная технология разработана Платоновым. Сперму центрифугируют в течении 10 мин. – 1200 об/мин.

Состав разбавителя: Н₂О дист. –100, Nа двууглекислый –8 мг, лактоза – 11г., натрий лимоннокислый­ – 89 мг, хелатон – 100 мг, желток– 1,6 мл, глицерин–3,5 мл, спермосан – 25 тыс. ЕД.

Эквилибрация идет 2 часа. Фасуют в пакеты из фальги по 25 мл. Замораживают в парах жидкого азота в течении 5-7 мин. Если морозят гранулы но объем их 0,2 мл (125-150 гранул) в пакет – 25 мл доза на осеменение.

Хряков – замораживают, но глицерина добавляют на 7-8 % больше. Оплодотворяемость низкая.