2. Состав сред для разбавления

По химическому составу разбавители делятся:

1 группа – неэлектролитические вещества (энергетические в-ва)

2 группа – солевая

3 группа – фосфолипидная (антишоковая)

4 группа – дополнительные

1 – в качестве экзогенного источника энергии в состав разбавителей вводят сахара (глюкоза, раффиноза, лактоза, гликокол и др. моносахара). Помимо основной роли, они понижают электропроводность среды, тем самым предупреждают потерю отрицательного электрического заряда и агглютинацию спермиев. Сахара выполняют и антитоксическую функцию.

2 – солевая группа – входят соли слабых кислот ( лимоннокислый натрий, 3-х замещенный 5-ти водный, хелатон (трилон Б) хлористый К) – создают нужный буфер разбавителя, т.е. защищают сперматозоидов от самоотравления (молочной кислотой).

3 – антишоковая – входит желток свежего куриного яйца, глицерин. В желтке находится лецитин (до 7 %) который обволакивает сперматозоиды оболочкой и предохраняет их от температурного шока, может служить источником энергии. Глицерин – действует по принципу антифриза: легко проникая в клетку (это трехатомный спирт) он понижает температуру замерзания и препятствует образованию кристаллов связанной воды, что позволяет избежать повреждения клеточных структур.

4 – дополнительные вещества: антибиотики, ферменты, гормоны и др.

Антибиотики – пенициллин, стрептомицин, стрептоцид белый водорастворимый – этот комплекс называется спермосан. Бывает спермосан – 3, 4, и др. Действие направлено на подавление развития большой группы микроорганизмов.

Дозы – бактериостатические, но не бактерицидные.

Ферменты – муциназа, каталаза – разжижает секрет слизи истекающей из шейки матки.

Гормональные препараты – усиливают моторику половой системы (окситоцин), нейротропные (прозерин, карбахолин).

Витамины В₃, В₁₂ – способствует лучшей переживаемости сперматозоидов вне организма.

Загустители – чтобы придать разбавленной сперме такую консистенцию, которая соответствует цельной сперме (хлорвиниловый спирт).

Красители – чтобы знать принадлежность спермы к тому или иному виду животных (используется пищевые красители, которые не токсичны).

3. Методика приготовления разбавителя

Вся посуда должна быть чистой и простерилизованной. Все химические реактивы (компоненты) должны быть ХЧ или ХЧДА. Куриные яйца используют только доброкачественные и из хозяйств благополучных по инфекционным заболеваниям.

Разбавитель готовят непосредственно перед получением спермы и хранят не более 3-4 часов.

• в стерильный сосуд высыпают отвешенные в соответствии с рецептом глюкозу и др. вещества (кроме желтка, глицерина и АБ), вливают дистиллированную воду и размешивают.

Затем среду стерилизуют в течение 5-10 минут в водяной бане и охлаждают до 35-40⁰С.

• куриное яйцо моют щеткой, протирают спиртовым тампоном, раскалывают пополам, сливают белок в банку, а желток осторожно перекладывают на стерильный листок фильтровальной бумаги, покатывают его, чтобы снять остатки белка, прокалывают и сливают в колбу.

• желток,АБ,глицерин добавляют в среду, когда температура её не выше 40⁰С.

Техника разбавления

• сперму разбавляют не позже 5-10 мин. после получения на искусственную вагину.

• разбавитель должен быть t-25-30⁰С.

• в измеренное количество спермы медленно, тонкой струей по стенкам вливают порциями отмеренный объем разбавителя, слегка перемешивая покачиванием.

• Следует иметь в виду, что иногда после разбавления подвижность спермиев несколько снижается, но спустя 10-15 мин восстанавливается.

• расфасовку, разбавление спермы проводят в стерильной помещении или настольном боксе.

• биологический контроль среды определяют по выживаемости спермиев при температуре 2-4⁰ при различных степенях разбавления спермы.

Каждая поступающая серия компонентов должна быть проверена на безвредность.

Степень разбавления:

В зависимости от концентрации и активности спермиев сперму производителей сельскохозяйственных животных разбавляют:

– быка в 5-50 раз, т.е. к одному объему спермы приливают 4-49 объемов разбавителя. В одной дозе должно быть не менее 10 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением.

• барана – в 2-4 раза (1:1–1:3)- 80 млн. спермиев.

• жеребца – 2-4 раза (3 млрд. спермиев).

• хряка – 2-9 (1:1-1:9) (3 млрд. спермиев).

Для хранения спермы при 0-5⁰С. её разбавляемой средой, приготовленной по рецепту: