2. Краткая история метода

Первое сообщение об успешной пересадке эмбрионов от одной самки в репродуктивный тракт другой сделал почти 100 лет назад английский биолог Хипп.

Видный советский биолог А.И. Лопырин на базе ВНИИ овцеводства и козоводства с 1949 по 1952 г. осуществил более 200 эмбриопересадок у овец. Результаты этих экспериментов он изложил в монографии «Биология размножения овец». Параллельно в Полтавском НИИ свиноводства А.В. Квасницкий успешно проводил опыты по пересадке эмбрионов свиней. К сожалению, эти работы, намного опережавшие зарубежный опыт тех лет, в дальнейшем были приостановлены как якобы бесперспективные.

Начало практической реализации метода трансплантации эмбрионов относится к 1971-1974 гг. Наибольший размах эта работа получила в США, Канаде, Англии, ФРГ, Франции, Ирландии, Австрии, Дании. Ежегодное число эмбриопересадок достигло 100 тыс. в США и Канаде, и 25-30 тыс. в странах Западной Европы.

У нас первого трансплантанта (теленка) получили в 1977 г. в Калужской области. Однако началом применения метода в животноводстве следует считать 1984 г.

Для быстрейшего решения научно-практических задач по эмбриопересадкам были созданы отделы трансплантации эмбрионов при отраслевых (головных) научно-исследовательских институтах. Координация их деятельности была в свое время возложена на Всесоюзное научно-производственное объединение по племенному делу в животноводстве.

За 1987 г. в нашей стране получено 7420 полноценных эмбрионов, родилось 1589 трансплантантов.

В 1986 г. в г. Тарту состоялся первый Всесоюзный симпозиум по вопросам трансплантации эмбрионов. В 1987 г. издана «Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота».

3. Отбор доноров и реципиентов, техника суперовуляции, осеменение коров-доноров

Отбор коров-доноров основывается на генетическом превосходстве по молочной продуктивности и хороших репродуктивных качествах.

Животные, признанные донорами, должны быть здоровыми, с ненарушенной воспроизводительной функцией, иметь среднюю или заводскую упитанность и нормальный метаболический профиль. Наиболее подходящий возраст – 4-9 лет. Телок и старых коров не используют, т.к. у них низкий суперовуляторный ответ на обработку гонадотропинами.

Коров-доноров ставят на суперовуляцию через 60 дней после отела. При этом их тщательно обследуют, чтобы исключить эндометрит и др. гинекологические заболевания. Обычно эмбрионы получают 2-3 раза, с интервалом 50 дней, после чего корову возвращают в стадо для естественного воспроизводства. Максимально возможное число суперовуляций – 8. От одной коровы в США за 8 суперовуляций получили 63 полноценных эмбриона.

На протяжении всего срока использования донору обеспечивают нормированное кормление, ежедневно предоставляют активный моцион.

В качестве реципиентов используют телок 16-18 месячного возраста, имеющих живую массу 340-410 кг, или молодых коров. Они должны иметь хороший физиологический статус, быть совершенно здоровыми. На каждого донора надо иметь от 6 до 10 реципиентов, поскольку часть из них дает атипичные реакции на гормональную обработку.

Техника суперовуляции

Суперовуляция – один из ключевых вопросов технологии пересадки эмбрионов. Только после успешной суперовуляции получают достаточное количество эмбрионов для эмбриопересадок.

До конца 70-х годов суперовуляцию вызывали однократной инъекцией лиофилизированной сыворотки жеребых кобыл очищенной от баластных белков (ГСЖК). Недостаток ГСЖК – длительный период полураспада (около двух недель), а это отрицательно сказывается на миграцию оплодотворенных яйцеклеток. Было предложено применять ГСЖК в сочетании с антисывороткой.

Стандартная схема суперовуляции (по Маплетоф, 1982 г.)

14-й день – утро – антисыворотка СЖК; вечер – осеменение; 15-й день 10-й день – 2500 ЕД ГСЖК; 12-й день – простагландин ПГФ₂α;– утро – осеменение; вечер –осеменение.

При обработке по приведенной схеме суперовуляций реагирует около 90% коров, получают в среднем 7,4 овуляции на донора.

Лучшие результаты дает применение фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). В настоящее время налажено производство ФСГ – фоллитропина на Каунасском заводе эндокринных препаратов, однако, по биологической активности он значительно уступает импортному препарату.

Увеличить синхронность процесса овуляции можно применением гипофизарного лютеинизирующего гормона который включают в состав ФСГ (5:1) либо инъекцией в период индуцированной охоты гонадотропного РнГ (сурфагона).

Схема суперовуляции:

10-й день: утро – 6 мг ФСГ, вечер – 6 мг ФСГ

11-й день: утро – 6 мг ФСГ, вечер – 5 мг ФСГ

12-й день: утро – 3 мг ФСГ + 500 мкг эстрофана

вечер 3мг ФСГ + 250 мкг эстрофана

13-й день: утро – 2мг ФСГ, вечер – 2 мг ФСГ

14-й день: утро – вечер осеменение

15-й день: утро – осеменение + 15 мкг сурфагона, вечер – осеменение.

После такой обработки у двух коров-доноров за одно извлечение получили 23 эмбриона и все пригодные для пересадки.

Существует четкая положительная связь между уровнем молочной продуктивности и числом эмбрионов. Так от коров с удоем 8-9 тыс. кг молока в одно извлечение получили 7,1 эмбриона, или на 1,8 эмбриона больше по сравнению с коровами продуктивностью 6-7 тыс. кг.

Осеменение коров-доноров

Охота у коров наступает в среднем через 45 ч. после инъекции эстрофана и длится в среднем 24 ч. Овуляция начинается спустя 54-60 ч после первой инъекции эстрофана, причем растягивается на срок до двух суток. Искусственно осеменяют первый раз через 8-12 часов после обнаружения охоты и повторно через 12 ч. При продолжительной охоте проводят третье осеменение так же через 12 ч. Если начало охоты не установлено, корову-донора осеменяют в фиксированное время – через 60 и 72 часа после инъекции ПГФ.

Спермодоза должна содержать не менее 50 млн. подвижных спермиев.