Алгоритм окраски мазка по методу Ожешко:

1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор соляной кислоты и подогревают над пламенем горелки в течение 1-2 мин (до образования паров), после чего остатки кислоты сливают.

2. Остывший мазок промывают водой, подсушивают и фиксируют над пламенем горелки.

3. Препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят карболовый фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают ещё раз.

4. После охлаждения снимают бумагу и промывают препарат водой.

5. Препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, наливая кислоту на стекло (до обесцвечивания).

6. Препарат несколько раз промывают водой.

7. Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего в течение 3-5 мин.

8. Препарат промывают водой и высушивают, промокая фильтровальной бумагой. Кислотоустойчивые споры окрашиваются в красный цвет, а бактериальная клетка – в голубой (синий).

4. Произвести забор материала (слизь из носа) стерильным тампоном, сделать мазок-отпечаток, окрасить щелочным метиленовым синим Леффлера, изучить под микроскопом и сделать заключение.

Алгоритм окраски зерен волютина по методу Леффлера:

1. На фиксированный мазок наливают раствор щелочного метиленового синего Леффлера на 3-10 минут.

2. Краситель смывают и промывают мазок водой.

3. Препарат высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.

Тела микробных клеток окрашиваются в синий цвет, а зерна волютина – в темно-синий цвет.

ПРИМЕЧАНИЕ:

Краситель – щелочной метиленовый синий Леффлера состоит из:

- насыщенного спиртового раствора метиленового синего – 30 мл;

- дистиллированной воды - 99 мл;

- едкого калия 1% - 1 мл.

5. Приготовить нативный препарат «раздавленная капля» из агаровой культуры бактерий, изучить под микроскопом и сделать заключение.

Алгоритм приготовления препарата «раздавленная капля»:

1. На обезжиренное предметное стекло наносят 1 каплю ИХН, в которой эмульсируют 1 петлю агаровой культуры (из бульонной культуры наносят 1 каплю культуры).

2. Обезжиренное покровное стекло ставят под углом к краю капли и осторожно покрывают её («раздавливают») так, чтобы при этом не образовались пузырьки воздуха, мешающие изучению препарата под микроскопом.

ПРИМЕЧАНИЕ:чтобы препарат быстро не высыхал, его помещают во влажную камеру, которая представляет собой чашку Петри, на дно которой положена влажная фильтровальная бумага, на нее кладут 2 спички и на них помещают препарат.

6. Приготовить нативный препарат «висячая капля» из бульонной культуры бактерий, изучить под микроскопом и сделать заключение.

Алгоритм приготовления препарата «висячая капля»:

Используют специальное предметное стекло с луночкой, покровное стекло, вазелин.

1. Глазной палочкой наносят слой вазелина вокруг лунки, отступив 1-2 мм от её края (в виде точек).

2. На обезжиренное, путем фламбирования, покровное стекло наносят петлей диаметром 4-5мм или пипеткой пастеровской, 1 каплю бульонной культуры, а если культура выращена на плотной питательной среде, то на покровное стекло наносят 1 каплю ИХН, в которой эмульгируют 1 петлю агаровой культуры.

3. Осторожно стеклом с лункой накрывают покровное стекло с каплей так, чтобы капля оказалась в центе лунки и прижимают. Склеившиеся стекла быстро перевора-чивают покровным стеклом вверх. Получается герметически закрытая камера.

Внимание! Если препарат приготовлен правильно, капля будет висеть в камере, и не высохнет в течение длительного времени.

II Изучите препарат в темном поле зрения, для чего после установки освещенности поля зрения поместить препарат на предметное стекло, затем закрыть диафрагму, опустить конденсор вниз, повернув, револьвер, установить объектив х 40.

7. Провести определение подвижности микроорганизмов культуральным методом и сделать заключение по демонстрационному посеву.