Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
mikra.docx
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
328.78 Кб
Скачать

III Практические умения и навыки.

1. Приготовить препарат из агаровой культуры, выращенной в чашке Петри, окрасить по методу Грама-Синева, изучить под микроскопом и сделать заключение.

Алгоритм приготовления мазка из агаровой культуры:

1. На чашке Петри с культурой отбирают изолированную колонию, обводя её стеклографом со стороны дна чашки.

2. На обезжиренное предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю изотонического раствора натрия хлорида (0,9%) и помещают его на рамочку, находящуюся на лотке для окраски препаратов.

3. Зажигают спиртовку, берут в правую руку петлю и фламбируют её.

4. Левой рукой берут чашку Петри с агаровой культурой, открывают крышку и охлаждают петлю о её внутреннюю поверхность, постукивая о крышку чашки. Затем осторожно снимают петлей 1/4 часть колонии, чашку закрывают и ставят в кювету (дном вверх!).

5. Левой рукой придерживают стекло (или держат в руке), а правой рукой петлей растирают агаровую культуру на стекле на границе с каплей ИХН, а затем эмульгируют её в капле и круговыми движениями равномерно распределяют её по стеклу так, чтобы мазок не доходил по 0,5 см до краев стекла. Затем петлю прожигают троекратно в пламени спиртовки и ставят в штатив.

6. Мазок высушивают над пламенем спиртовки.

7. Фиксируют мазок физическим способом: стекло берут большим и указательным пальцами и троекратно проводят через верхнюю часть пламени спиртовки в течение 6 секунд, держа его мазком вверх.

8. Препарат помещают на рамочку для окраски, исследуемым материалом вверх. Пипеткой наносят на препарат фуксином Пфейффера и окрашивают в течение 1-2 минут.

9. Краситель сливают, препарат промывают водой, нанося её по ребру стекла до полного отхождения струй красителя.

10.Препарат высушивают, осторожно промокая его кусочком фильтровальной бумаги, и микроскопируют.

2.Приготовить препарат из мокроты, окрасить по методу Циля-Нильсена, изучить под микроскопом и сделать заключение.

Алгоритм приготовления мазка из мокроты

1. Баночку (плевательницу), открывают медленно и аккуратно, избегая разбрызгивания материала и обожженной в пламени спиртовки и охлажденной бактериологической петлей или сломанными концами деревянной палочки (новой для каждой порции мокроты) захватывают небольшое количество мокроты с гнойными комочками.

2. Материал распределяют на предметном стекле как можно более тонким слоем на площади приблизительно 1 х 2 см.

ВНИМАНИЕ! Мазок должен быть достаточно тонким, так как в противном случае он может быть смыт с предметного стекла в процессе промывки.

На каждом предметном стекле делается не более 1 мазка.

ПРИМЕЧАНИЕ: Необходимо использовать только новые отмытые, обезжиенные в спирте или смеси Никифорова, стекла без царапин и осколков.

II Окрасьте один препарат по методу Грама-Синева, а второй – по Цилю-Нильсену.

Алгоритм окраски препарата по Цилю-Нильсену:

  1. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги и наливают карболовый фуксин Циля. Затем, удерживая препарат пинцетом, медленно нагревают стекло над пламенем спиртовки до появления пара. Не допускается кипение или высушивание окрашивающего раствора на предметном стекле. Если раствора недостаточно, его нужно добавить ещё и нагреть второй раз. Мазок с прогретым раствором оставляют на 5 мин, после чего фильтровальную бумагу удаляют пинцетом и помещают её в бачок для сбора отходов.

  2. Предметное стекло аккуратно ополаскивают (каждое отдельно!) под слабой струей воды из водопроводного крана до полного удаления окрашивающего раствора. Мазок смывают ребром к струе воды.

ВНИМАНИЕ!Не разрешается смывать и обесцвечивать одновременно несколько мазков во избежание перекрестного заражения.

  1. Стекло помещают на мостик и обрабатывают (каждое индивидуально) 25% раствором серной кислоты до отхождения струй красителя.

  2. Смывают водой как описано выше.

  3. Обрабатывают каждый мазок индивидуально 96о этиловым спиртом в течение 5 мин.

  4. Промывают водой как описано выше.

  5. Докрашивают 0,3% метиленовой синькой в течение 1 мин.

8. Промывают водой как описано выше и оставляют сушить на воздухе.

Результат окрашивания: кислотоустойчивые и спиртоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, а некислотоустойчивые микробы и клетки – в голубой или синий.

3. Приготовить препарат из чистой культуры антракоидов, окрасить по методу Ожешко, изучить под микроскопом и сделать заключение.

I Приготовьте мазок из чистой культуры антракоидов (B.cereus) и высушите над пламенем спиртовки. Не фиксируйте мазок!!! Окрасьте мазок по методу Ожешко.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]