62.Методы триангуляции. Измерение количественных параметров пиков различного разрешения.

Пик рассматривают как треугольник и площадь его рассчитываюткак площадь треугольника. Известны три метода триангуляции (triangle –треугольник). Эти методы приближенные, поскольку площадь пика аппроксимируется площадью одного из трех треугольников.

а) В первом методе триангуляции за площадь пика принимается площадь описанного треугольника, образованного касательными, проведенными к сторонам пика в точках перегиба, и отрезком, отсекаемым касательными на основании пика (рис. 30, а).

Площадь описанного треугольника рассчитывается обычно поформуле:

S = ½ ⋅ h^'⋅ b₀ (65)

где h' – высота описанного треугольника; b₀ – ширина пика на нулевой линии.

Этот метод дает около 97% (96,8%) от площади гауссова пика. Недостатки этого метода состоят в необходимости дополнительных геометрических построений (проведение касательных), которые не всегда могут быть выполнены легко и с достаточной точностью. Особенно это касается узких пиков. При этом точка пересечения касательных может оказаться за пределами диаграммной ленты.

б). Во втором методе триангуляции (рис. 30, б) предложено экстраполировать «прямолинейные» участки ветвей пика только вниз до пересечения с основанием и площадь рассчитывать по формуле:

S = ½ ⋅ h ⋅ b₀ (66)

Этим методом находят около 80% (79,8%) от площади гауссового пика. Здесь частично преодолеваются недостатки первого метода.

в) На практике наибольшее распространение получил третий метод триангуляции (рис. 30, в). Метод произведения высоты на ширину пика на половине его высоты. В этом случае геометрические построения упрощаются. Процесс измерения состоит из четырех операций, а именно:

– проведение основания под пиком (интерполирование нулевой линии между началом и концом пика);

– измерение высоты пика;

– нахождение середины высоты;

– измерение ширины пика на половине высоты.

Площадь рассчитывается по формуле:

S = h ⋅ b_0,5 (67)

Этим методом находят около 94% (93,9%) от площади гауссовапика. Точность измерения площади в методе «h ⋅ b» зависит от формы иабсолютных размеров пика. Форму пика принято характеризовать отношением «h / b_0,5» . Ошибка минимальна при h / b*0,5 равна 5−6%. С повышением абсолютных размеров пика точность измерения площади пика возрастает.

Истинная же площадь гауссова пика может быть найдена по формуле:

S_ист = h⋅b_0,368 (68)

Определение площадей не полностью разделенных пиков

Р ассмотрим случай наложения двух гауссовых пиков, когда огибающая имеет минимум (рис. 32). При наложении двух пиков происходитискажение измеряемых параметров пика (высоты и ширины). При этомстепень искажения параметров зависит от полноты разделения и соотношения высот соседних пиков. Известны различные приемы расчета хроматограмм с не полностью разделенными пиками.

Метод Бартлета и Смита (корректировки высоты)

Площадь неразделенных пиков рассчитывается по обычной формуле для гауссовых пиков, например по формуле (73).Однако в формулу подставляют значения истинных параметровпиков, а не измеренных линейкой на хроматограмме.Корректировка высоты пиков, учитывающая их взаимное влияние.

Метод опускания перпендикуляра

При взаимном наложении двух пиков площадь под огибающей кривой равна сумме площадей под индивидуальными пиками (рис. 26). В этом методе границей двух не полностью разделенных пиков является перпендикуляр, опущенный из минимума огибающей кривой на основание пиков. За площадь первого пика принимается площадь, лежащая слева от перпендикуляра, а за площадь второго пика принимается площадь, лежащая справа. Этот метод приближенный, поскольку перпендикуляр является истинной границей только в случае неразделенных пиков одинаковой высоты и ширины. Для того чтобы исключить систематические ошибки, измеренные площади умножают на значения поправочных коэффициентов.