57.Флуоресцентные детекторы

Флуориметр находит применение в экологической химии, биологии, медицине, при анализе пищевых продуктов, витаминов, стероидов.

В тех случаях, когда сам по себе образец не флуоресцирует, можно до или после разделения исследуемого образца на колонке получить соответствующие производные. Чувствительность флуориметров в 100 раз превышает чувствительность УФ-детекторов, однако линейный диапазон для них более узкий — 104.

В флуориметрических детекторах можно использовать любой источник света с фильтром или монохроматором, важно, что освещение данного объема исследуемого образца должно проводиться по наиболее короткому световому пути.

В качестве источников излучения обычно используются газоразрядные лампы: ртутная (254 нм), цинковая (214 и 308 нм), кадмиевая (229, 326 нм; предел обнаружения составляет 5 • 10^-10 г), источник в-частиц от 63Ni-радиоактив-ного источника.

При флуоресцентном детектировании имеют дело с достаточно разбавленными растворами. Количество флуоресцентного света, излучаемого возбужденными молекулами, пропорционально интенсивности источника возбуждающего излучения, объему освещаемого раствора пробы, концентрации раствора обнаруживаемого соединения.

Поглощение в УФ-области проводят при длине волны максимального поглощения для данной группы соединений. Излучение измеряют на выходе фильтра, не пропускающего лучи возбуждения. Длина волны флуоресцентного излучения должна быть больше длины волны поглощенного света. Подвижная фаза не должна поглощать свет ни на длине поглощения, ни на длине волны излучения.

Длину волны возбуждающего излучения рекомендуется выбирать таким образом, чтобы образовывалось максимальное количество молекул в возбужденном состоянии, возврат которых в основное состояние происходил бы в результате излучения. Этому также благоприятствует использование мицеллярных растворов для индуцирования флуоресценции при комнатной температуре.

В тех случаях, когда необходимо существенно понизить предел обнаружения, следует применять фильтр, дающий максимально возможное светопропускание на выбранной длине волны возбуждающего излучения, и максимально снизить интенсивность излучения с большей длиной волны.

Факторы, способные искажать результаты измерения флуоресценции: 1. Примеси, содержащиеся в элюенте, и, в первую очередь, растворенный кислород, способны вызывать гашение флуоресценции. 2. Рассеянный свет от источника возбуждающего излучения, который возникает из-за наличия в элюате крупных молекул других рассеивающих излучение частиц. Перед началом работы следует убедиться в отсутствии фоновой флуоресценции.

58.Электрохим., кондуктометр. И вольтамперометр. Детекторы

Электрохимические детекторы. Разл. электрохимические детекторы, которые реагируют либо на изменение свойств элюента, либо на конкретное анализируемое соединение. К первому типу относится кондуктометрический детектор, ко второму — амперометрические. Большинство электрохимических детекторов работают в амперометрическом режиме, при котором поддерживается постоянное напряжение между двумя электродами, погруженными в поток элюента, и регистрируется зависимость силы тока от времени.

Кондуктометрический детектор. При создании разности потенциалов ионы, находящиеся в растворе, начинают перемещаться по направлению к электродам. Проводимость зависит от числа заряженных частиц в растворе — именно эта зависимость и положена в основу количественной оценки в кондуктометрии. Таким образом, для получения количественных результатов должна быть постоянной молярная проводимость. При применении детекторов этого типа следует избегать протекания электрохимических реакций на поверхности электродов, поэтому используют источники переменного тока с частотой от 50 до 1000 Гц и напряжением от 5 до 10 В. Измерения проводятся с применением моста сопротивлений Уитстона.

Детекторы данного типа наиболее пригодны для определения заряженных соединений в элюате, предпочтительны при анализе малых концентраций ионов.

Вольтамперометрический детектор. Детектирование заключается в измерении электрического тока в ячейке, возникающего при окислении (восстановлении) регистрируемого вещества на поверхности рабочего электрода при подаче на него определенного напряжения. Этот детектор обладает очень высокой чувствительностью, он высокоселективен.

Вольтамперометрический детектор используется при анализе веществ, обладающих электрохимической активностью, т.е. способностью при определенном потенциале окисляться или восстанавливаться.

В качестве рабочего электрода используются электроды из платины, золота, углеродной пасты, графита. Электрод, на котором протекает интересующая нас реакция, и является рабочим электродом: катод (реакция восстановления) или анод (реакция окисления). Для увеличения проводимости ПФ в водный элюент добавляют нитрат калия, перхлорат натрия, а в органический — перхлорат тетраэтил аммония.

Между насосом и дозирующим устройством в линию подачи растворителя часто помещают скруббер — ячейку большей емкости.

На практике легче осуществляется окисление, так как не надо удалять предварительно растворенный кислород. Измеряя зависимость силы тока от приложенного напряжения для электроактивного соединения в статических условиях, получают вольтамперограмму. Характерная особенность вольтамперограммы — наличие участка, на котором сила тока после резкого увеличения практически не меняется с изменением приложенного напряжения. Этот ток наз. предельным. В величину предельного тока входит вклад электролита подвижной фазы (остаточный, или фоновый, ток).

В ячейке детектора создается такая разность потенциалов, при которой достигается предельный ток для определенного класса исследуемых веществ.