3.6 Опис технологічного процесу

Рисунок 3.7-Гідро-пневматична схема виробництва гінзенозиду

СТ1.1-приготування компонентів живильного середовища; Ст1.2.-підготовка води;Ст1.3-приготування живильного середовища; ТП2-приготування спирту етилового;ТП3-нарощування біомаси;ТП4-екстракція біомаси;ТП5-очищення витяжки;ТП6-відстоювання і фільтрування напівфабрикату;ТП7-отримання настоянки;ПМВ1-розлив та маркування;ПМВ2-пакування сухої речовини

3.6.1.Приміщення для роботи з культурами клітин

Стерилізація живильних середовищ, як і всі інші маніпуляції при роботі з клітинними культурами, проводиться в боксових приміщеннях або в ламінарному боксах. Боксове приміщення являє собою ізольовану кімнату з не сорбуючим пил покриттями, що має передбоксник і забезпечену необхідним загальним і спеціальним освітленням, системами припливної та витяжної вентиляції, холодним і гарячим водопостачанням, а також підводами газів та стисненого повітря. Альтернативою боксовим приміщенням, що вимагає менших витрат на устаткування, є ламінар-бокси, або стерильні робочі місця. У цьому випадку в будь-якому приміщенні може бути створений локальний стерільний об'ем, необхідний для роботи і створює біологічну захист користувачів. Технічно завдання вирішується шляхом постійного обдування місця проведення робіт ламінарним потоком. При роботі з завідомо непатогенними матеріалами потік Обезпилення повітря з робочої зони виходить безпосередньо в навколишній простір. У випадку роботи з потенційно патогенним матеріалом повітря перед виходом з робочої зони додатково фільтрується, можливість обдування оператора при цьому виключена. Залежно від пристрою ламінар-боксу потік обезпилення повітря в робочій зоні може бути горизонтальним, вертикальним або похилим.

Ламінар-бокс з горизонтальним потоком .Обезпилення повітря типу УОБГ (установка обеспилування біологічна з горизонтальним потоком) забезпечує очищення повітря, що подається в робочу зону, шляхом фільтрації на фільтрах грубого і тонкого очищення, вбудованих в прилад (у міру забруднення грубий фільтр промивається, тонкий змінюється) . Прилад має вбудовані джерела освітлення, УФ опромінення (для стерилізації робочої зони в перервах між використанням боксу) і регулятор швидкості повітряного потоку.[11]

Ламінар-бокс для робіт з потенційно патогенними культурами типу БП-4004 («Бокс-Р») має деякі відмінності. У приладі забезпечується рециркуляція повітряного потоку, яка полягає в тому, що повітря з робочого об'єму потрапляє на спеціальний фільтр тонкого очищення, звідки частина його виходить в навколишній простір, а решті потік повторно проходить через фільтр тонкого очищення і знову надходить у робочий об'єм. Цим досягається неможливість виносу оброблюваного матеріалу в приміщення. Можливість потрапляння повітря, що виходить на оператора ,запобігається створенням зони підсосу на відкритій стороні робочого об'єму боксу. Прилад має вбудовані джерела світла і УФ опромінення, стільницю з нержавіючої сталі. Передню частина робочого об'єму закрита прозорим склом, що переміщуються по висоті. Бокс забезпечений системою регулювання швидкості потоку повітря і індикаторами забруднення фільтру тонкого очищення.

Перераховані вище типи ламінар-боксів призначені для разміщення в будь-яких виробничих приміщеннях, що мають припливну вентиляцію з грубої попередньої очищенням повітря.

Прилади та апарати для миття та стерилізації посуду. Прилади та апарати для миття та стерилізації посуду забезпечують виконання всіх етапів технологічного процесу: попередню стерилізацію посуду, що надходить з досвіду, насиченим водяною парою в парових стерилізаторах (автоклавах); попереднє замочування у водних розчинах хімічних реагентів (5% розчині гипохлоріта натрію, 3 % розчині перекису водню і т. д.); полоскання після замочування холодної або злегка нагрітою водою; миття гарячим розчином детергенту з низьким піноутворенням; вторинне полоскання гарячою водою; фінішне полоскання дистильованої або загальнолабораторною водою; сушку в сушильних шафах з примусовою продувкою гарячим повітрям; упаковку і фінішну стерилізацію в парових або повітряних стерилізаторах.

Оптимальним варіантом для миття посуду є використання автоматичних мийних машин («Forma Scientific», «Miele», «Hotpack-Heinicke» чи вітчизняних машин типу P3-AMM).

Прилади для дозування, розведення і пробовідбор. У практиці робіт з клітинними культурами постійно виникає необхідність масового дозування, пробовідбору або розведення біологічно активних рідин. Для цього використовуються автоматичні або напівавтоматичні пристрої, звані в різних джерелах дозатори-ділютори, автоматичні піпетки і т. п.

Одним з основних вимог до такого роду приладів є відсутність контакту між дозованим розчином і частинами конструкції дозатора. Даним вимогам відповідають напівавтоматичні та автоматичні шприцеві дозатори, які виробляють розведення або дозування одночасно по двох каналах і можуть працювати як в автоматичному, так і напівавтоматичному режимах.

Найбільш часто вживаний автоматичний шприцевий дозатор типу «Дозатрон-4» призначений для автоматичного дозування рідин в імунологічні планшети з мікрокювет. Обсяг одиничної дози встановлюється залежно від цілей експерименту.

Піпетки лабораторні типу ПЛ-01, дозатори піпеточні типу КДП-1 і П1 виробляють напівавтоматичне дозування біологічно активних рідин. Піпетки лабораторні ПЛ-01 поставляються в наборах з 3 моделей. Величина дози задається користувачем у певному діапазоні (2-20 мкл, 20-200 мкл, 200-1000 мкл). Комплект дозаторів піпеточних КДП-1 включає 8 моделей, кожна з яких забезпечує видачу 2 фіксованих за обсягом доз (від 5 до 1000 мкл). Комплект дозаторів П1 включає 5 моделей, налаштованих на 1 фіксовану дозу (від 20 до 500 мкл). Всі зазначені типи пристроїв припускають викокористування змінних наконечників, які можуть піддаватися парової стерилізації і повторно використовуватися.

Описані вище прилади дозволяють роботу з рідинами, нагрітими до 40 ° С і мають в'язкість, близьку до в'язкості води. Тим самим не забезпечується дозування поживних середовищ на основі агару, які для додання їм малої в'язкості повинні бути нагріті до температури не менше 60о С. У таких випадках використовуються прилади типу «Агар-1». Цей апарат для розливу поживних середовищ, що складається з перистальтичного насоса-дозатора і розливного механізму, обеспечити кільсть автоматичне одночасне заповнення протягом 1 хв 16 стеклянних чашок Петрі діаметром 100 мм, що знаходяться в спеціальних планшетах. Стерильні умови в апараті підтримуються шляхом УФ опромінення його внутрішнього об'єму.

В експериментах також застосовуються пристрої малої лабораторної техніки, які не є за своєю суттю дозаторами, але здатні полегшити цей процес. Це так звані прилади «Pipet-Aid» (фірми «Flow», «Bellco», «Cole-Parmer» та інші), призначені для проби-відбору і видачі дози при роботі з піпетками Пастера і будь-якими градуйованими піпетками ємністю до 75 мл. Піпетка вставляється в спеціальний тримач, з'єднаний з малогабаритним вакуумним насосом, що знаходяться або безпосередньо в тримачі, або автономно. Управління роботою приладу проводиться натисненням кнопок, розміщених на утримувачі[6].