Лекция Тема: «Приготовление и наклеивание парафиновых срезов» План

1. Приготовление серийных парафиновых срезов.

2. Возможные погрешности при изготовлении парафиновых срезов.

3. Снятие парафиновых срезов с микротомного ножа.

4. Подготовка предметных стекол к наклеиванию.

5. Приготовление смеси белка с глицерином и нанесение её на предметные стёкла.

6. Основные способы расправления и наклеивания парафиновых срезов на стёкла, смазанные белком с глицерином.

7. Сушка парафиновых срезов.

8. Другие способы расправления и наклеивание парафиновых срезов.

9. Маркировка предметных стекол.

10. Оценка качества приклеивания парафиновых срезов.

I. Приготовление серийных парафиновых срезов.

Успешное приготовление парафиноых срезов зависит от остроты бритвы и от хорошей заливки материала, которая в свою очередь зависит от безукоризненного обезвоживания. Хорошо режутся равномерно плотные, упругие блоки. При неравномерной плотности срезы получаются разной толщины.

Для резки парафиновых блоков применяют ротационные микротомы, которые дают возможность получать серийные срезы, т.е. ленточки (серии), в которых срезы прикреплены к друг другу краями и располагаются полоской. Получение таких срезов удобно в практической деятельности лаборанта-гистолога, а также просто необходимо для специальных целей, таких, как исследование эмбриологических объектов, изучение строения глазного яблока и т.д.

Для получения серийных срезов с блока надо соблюдать некоторые требования:

1. Хорошо оточенный нож устанавливают поперечно. Руку ведут с помощью толчкообразных (резких) движений ножа.

2. Исследуемый материал должен быть залит в парафин хорошего качества с температурой плавления около 48 – 52⁰.

3. Парафиновому блоку перед резкой необходимо придать строго прямоугольную форму.

4. Наиболее удачна резка серийных срезов идёт при температуре помещения18 – 22⁰.

II. Возможные погрешности при изготовлении парафиновых срезов.

Для того, чтобы получить хорошие гистологические срезы, необходимо уметь своевременно распознавать и устранять причину, ухудшающую качество срезов.

1. Срез крошится. Причины: 1) твердый парафин; 2) низкая температура окружающей среды; 3) медленное охлаждение парафина при заливке; 4) боль­шой угол наклона ножа. Устранение: 1) перезалить материал в более мягкий парафин после предварительного растапливания блока в термостате: 2) ды­шать на поверхность блока (согревание) перед каждым движением ножа или приспособить над блоком электрическую лампочку; 3) изменить угол наклона ножа.

2. Залитый материал в процессе резки выпадает из окружающей массы парафина. Причины: 1) при переносе кусочка в формочку для заливки про­изошло его охлаждение; 2) заливка произведена охлажденным парафином; 3) недостаточное удаление спирта перед пропитыванием. Устранение: в пер­вом и втором случаях необходимо блок растопить в термостате и залить заново, строго соблюдая правила заливки, в третьем случае после предвари­тельного растапливания материал переносят в промежуточные среды (для удаления спирта), затем вновь пропитывают и заливают.

3. Плоскость среза неровная, материал плохо режется или совсем не режется, нож подскакивает над поверхностью блока. Причина-переуп­лотнение материала при проводке и фиксации. Устранение невозможно, 1) можно лишь несколько размягчить материал, если на поверхность резания перед каждым движением ножа наносить кисточкой слой горячего парафина (дав ему затем остыть) или дышать на поверхность блока; 2) уменьшить угол резания. Серии срезов при этом получить нельзя, но отдельные срезы режутся лучше.

4. Срезы закручиваются, прилипают к поверхности ножа, мнутся. При­чины: 1) малый угол наклона ножа; 2) мягкий парафин; 3) высокая темпера­тура окружающей среды. Устранение: 1) изменить угол наклона; 2 и 3) пере­залить материал в более твердый парафин или охладить блок путем поме­щения перед резкой в холодильник (можно также положить на поверхность резания кусочек льда).

5. Приклеивание, сморщивание или разрыв срезов, особенно при резке органов, богатых костной, хрящевой или плотной соединительной тканью, могут быть следствием их электризации. Устранение: помещать на лезвие (в месте прохождения среза) каплю воды, дышать на лезвие и блок, натирать участок лезвия и прилежащую часть ножа куском твердого парафина.

6. Срезы разрываются или покрыты бороздами. Причины: 1) зазубрины на лезвии ножа; 2) грязный парафин (плотные соринки царапают срез и пор­тят лезвие); 3) материал плохо декальцинирован. Устранение: 1) точка и правка ножа или перемещение в ножедержателе; 2) перезаливка в чистый парафин; 3) устранить нельзя.

7. Плоскость среза не однородна (беловатая в средней части). Причина -недостаточное обезвоживание. Устранение: расплавление блока и проведе­ние материала через промежуточные среды до абсолютного спирта. После обезвоживания проводят через промежуточную среду, пропитывают и за­ливают.

8. Срезы свертываются. Причины: 1) твердый парафин; 2)толстые срезы; 3) низкая температура окружающей среды. Устранение: 1) перезалить материал в более мягкий парафин; 2) уменьшить толщину срезов; 3) дышать на поверхность блока или приспособить над блоком электрическую лампочку.

9. Лента из парафиновых срезов отклоняется в сторону. Причины: неправильно вырезан блок. Устранение: подрезать блок.

10. Лишь каждый второй срез годен для исследования. Причины: 1) маленький угол наклона ножа; 2) слишком тонкий срез. Устранение: 1) увеличить угол наклона ножа; 2) увеличить толщину срезов.