9. Характеристика сред для заключения.

Последний этап изготовления гистологических препаратов - заключение срезов. Его производят с целью получения пригодных для долгого хранения препаратов и защиты их от высыхания, загрязнения и повреждения. Среды для заключения можно разделить на две основные группы:

а) смешивающиеся с водой (глицерин, гуммиарабик, гуммисироп, желатин, глицерин - желатин);

б) не смешивающиеся с водой (различные смолы, полистирол).

Вещество первой группы являются одновременно просветляющими и не требуют обезвоживания препарата, тогда как перед заключением препарата в смолы, его необходимо тщательно обезводить и просветлить в карбол – ксилоле (толуол, бензол) или оптических маслах (бергамотовое, каепутовое, гвоздичное и др.).

Среды, смешивающиеся с водой применяют в тех случаях, когда препарат не может соприкасаться со спиртами и ксилолом (например, при окраске на жир проведение через спирты вызывает его растворение и вымывание).

После заключения препаратов в жидкие незастывающие среды (глицерин, гуммисироп) необходимо производить их окантовку во избежание высыхания среды и сползания покровных стекол. Для этой цели используют различные лаки, целлоидин, парафин, которые наносят непрерывным кантом на все стороны покровного стекла стеклянной палочкой или глазным скальпелем. Если препарат не требует длительного хранения, то его обычно окантовывают парафином. Горячий парафин наносят кисточкой на край покровного стекла. Наиболее часто из сред, смешивающихся с водой, применяют глицерин – желатин и гуммисироп.

Для приготовления глицерин - желатина берут 41 мл дистиллированной воды, засыпают 7г желатина и оставляют для набухания в течение нескольких часов. Затем прибавляют 50 мл глицерина и 1г концентрированной карболовой кислоты, нагревают в течение 10-15 мин, постоянно помешивая, после чего отфильтровывают через обычную или стеклянную вату. При комнатной температуре смесь представляет собой плотную массу, поэтому перед употреблением её нужно подогреть в водяной бане или термостате при 56⁰С

Несмотря на то, что методика заключения препаратов в безводные срезы (смолы) более сложная и повышает стоимость препарата, она применяется наиболее часто, так как имеет ряд важных преимуществ перед методикой заключения в водные среды. Основными их них являются: высокая степень прозрачности препарата, длительное сохранение его окраски и структур без изменений, удобство хранения. Наиболее распространенной смолой для заключения является бальзам (канадский или пихтовый).

Бальзам представляет собой прозрачную, желтоватого цвета древесную смолу, обладающую консервирующими свойствами, сохраняющую прозрачность препарата и имеющую показатель преломления, близкий к показателю преломления стекла. Бальзам заготавливают заранее, помещая куски затвердевшей смолы в широкогорловую банку и заливают ксилолом (или толуолом) в таком количестве, чтобы бальзам получился жидким и его можно было профильтровать. Ставят в термостат. После растворения смолы приготовленный раствор фильтруют и оставляют в открытом сосуде в вытяжном шкафу до тех пор, пока ксилол испариться настолько, что бальзам приобретает консистенцию жидкого меда. Хранят бальзам в специальной баночке с притертым колпачком, края которого смазывают вазелином, чтобы он не присох к баночке. Если нет специальной склянки, можно использовать небольшой широкогорлый флакон из-под лекарств, закрывающийся эластичной хлорвиниловой пробкой. В центре пробки делают отверстие и вставляют в него стеклянную палочку, при помощи которой извлекают бальзам.

Обычно бальзам имеет слабокислую реакцию, что вредно отражается на препаратах, окрашенных некоторыми красителями. Для нейтрализации бальзама добавляют небольшое количество порошка карбоната калия или натрия.

В гистологической практике для заключения срезов широкое применение получили пластические массы, растворяющиеся в ксилоле, толуоле, бензоле, т.е. заменяющие канадский и пихтовый бальзам, например полистирол. Применение пластических масс позволяет отказаться от покровных стекол, так как пластмасса пропитывает срез и одновременно покрывает его тонким слоем сверху, заменяя тем самым покровное стекло.

С завода полистирол получается в виде отдельных, твердых прозрачных кусочков. Для заключения гистологических срезов следует пользоваться 30% раствором полистирола в ксилоле (толуоле), который имеет консистенцию густого меда и совершено прозрачен. Хранить его надо в банке с притертой пробкой, если со временем он станет слишком густым, к нему добавляют ксилол.

При нанесении раствора полистирола на стекло через 30 – 40 минут образуется прозрачная пленка. В быстроте образования пленки состоит большое преимущество полистирола, однако пленка обладает существенными недостатками: она хрупка, ломка и плохо прилегает к стеклу. Для устранения этих недостатков к раствору полистирола необходимо добавить так называемый пластификатор - вещество, придающее эластичность и гибкость полистироловой пленке, а также значительно увеличивающее её способность прилипать к стеклу. В качестве пластификатора следует применять дибутилсебацинат (дибутилфтолат), представляющий собой бесцветную маслянистую жидкость, которая при обычной температуре практически почти не испаряется и придает эластичность и гибкость полистероловой пленке на очень долгое время. В готовый раствор полистерола следует добавить пластификатор в таком количестве, чтобы раствор последнего в полистероле был равен 6% (т.е. на 100 мл р-ра полистерола – 6 мл пластификатора).