18

Лекция №21 Тема: «Общие и специальные методы окрашивания» План

1. Значение окрашивания срезов

2. Характеристика основных типов красителей

3. Методы окрашивания гистологических препаратов

4. Общие правила окрашивания гистологических препаратов

5. Предварительная подготовка срезов к окрашиванию.

6. Обзорные (общие) методы окрашивания.

7. Специальные методы окрашивания.

8. Просветление срезов.

9. Характеристика сред для заключения.

10. Методика заключение срезов в бальзам.

11. Оценка качества готового гистологического препарата.

I. Значение окрашивания срезов

В неокрашенном срезе можно различить только те структуры, которые отличаются друг от друга различным преломлением световых лучей. Однако большинство деталей препарата одинаково преломляют свет и в неокрашенном срезе рассмотреть их не удается. Но все они по разному воспринимают красители, поэтому для детального изучения структуры, срезы окрашивают.

Несмотря на то что окрашивание срезов имеет давнюю историю, до настоящего времени полностью неясна сущность механизмов действия многих красителей. Несомненно лишь, что в основе окрашивания тканевых микроструктур лежат физико-химические процессы. Из физических факторов в первую очередь следует отметить явление диффузии (проникновение), адсорбции (поверхностное впитывание), абсорбции (глубокое пропитывание) красителя, а также его растворимость, из химических – электролитические свойства красящих растворов и самих тканей. Немаловажное значение имеют плотность тканей и дисперсность красителя. Первое свойство определяет последовательность окрашивания отдельных структур, второе – скорость процесса окрашивания.

II.Характеристика основных типов красителей

Именно на электролитических свойствах основано разделение применяемых в гистологической практике красителей на три группы: основные, кислотные и нейтральные. Большинство структур в какой-то степени окрашивается и кислыми и основными красителями, но почти всегда имеет большее сродство к тем или другим. Этим и пользуются для того, чтобы четче выявить различные детали в строении препарата. В некоторых случаях неодинаковая окраска различных частей зависит не от типа красителя, а от того, пропитывает ли краситель структуру или осаждается на её поверхности.

Основные красители представляют собой красящее основание или его соль и окрашивают клеточные и тканевые структуры кислой природы, например, хроматин ядра, содержащий ДНК, ядрышко, содержащее РНК. Структуры, красящиеся основными красителями называются базофильными, т.е. любящие основные краски. К основным красителям относятся гематоксилин, тионин, метиловый зеленый, метиловый синий, кармин.

Кислые красители – кислоты и их соли, в силу чего они окрашивают вещества и частицы основной природы, например, гранулы эозинофильных лейкоцитов, цитоплазму клеток. Образования, окрашивающиеся ими, называются оксифильными (ацидофильный – любящий кислоту). В эту группу красителей входит эозин, эритрозин, кислотный фуксин, конго красный, оранжевый G, пикриновая кислота и др.

Нейтральные красители образуются при соединении водных растворов кислотного и основного красителей (соединения красящей кислоты с красящим основанием). К этой группе относятся судан III, эозиновокислый, метиловый синий.

Красители, применяемые для гистологических целей, делят на природные и искусственные.

Следует помнить, что для выбора красителя важное значение имеет предшествующая обработка среза, в частности фиксация. В зависимости от того, в какой жидкости был зафиксирован кусочек органа, красители по-разному будут окрашивать одни и те же структуры. Большое значение имеет для последующей окраски и способ заливки кусочка – парафиновые и целлоидиновые срезы окрашиваются в ряде случаев неодинаково. Так, например, при окраске на жир нельзя применять фиксацию спиртом - последний растворяется жир. При фиксации с осмиевой кислотой ядра хорошо окрашиваются сафранином и хуже – кармином, гемалауном и другими красителями. Учитывая все эти обстоятельства, нужно по возможности заранее выбирать соответствующий метод предварительной обработки кусочка органа: фиксацию и заливку.