Просветление срезов
Для того, чтобы окрашенный препарат можно было исследовать в происходящем свете и долго хранить, он должен быть защищен от высыхания, загрязнения и повреждения. Поэтому дальнейшая обработка препаратов, независимо от способа окрашивания, совершенно одинакова и цель её - просветление срезов и заключение их в какую – нибудь среду.Просветление делает препарат прозрачным, проходимым для лучей света и поэтому удобным для исследования. Различают две группы просветляющих веществ в зависимости от того, способны ли они просветлять срезы после извлечения их из воды или только после обезвоживания спиртом.Первую группу веществ, т.е. просветляющих срезы после воды, составляют глицерин, глицерин – желатин, насыщенный раствор углекислого калия ит.д. Подобные просветляющие вещества обычно употребляют при некоторых специальных методах исследования, например на липиды, амилоид (т.к. жиры растворяются в спирте и ксилоле). В этом случае окрашенный срез извлекают из воды, удаляют избыток воды вокруг среза тряпкой, кладут каплю глицерина или другое просветляющее вещество из этой группы и покрывают покровным стеклом.Ко второй группе веществ, просветляющих срезы после спирта, относится ксилол, толуол, эфирные масла (гвоздичное, бергамотовое, каепутовое), скипидар, карбол - ксилол (карбол - толуол), карбол – скипидар. Последние два готовятся из расчета 1 часть кристаллической карболовой кислоты на 3-4 части ксилола (толуола) или скипидара. Карболовую кислоту предварительно расплавляют в термостате при температуре 560С и смешивают с ксилолом или скипидаром в теплой посуде. Этот раствор имеет слабый красновато – желтый оттенок.Для просветления срезов чаще всего пользуются веществами второй категории, ибо они обладают более высоким просветляющим эффектом и дают прочные препараты. Так как эти вещества не смешиваются с водой, препараты перед просветлением нужно тщательно обезводить. Срезы обрабатывают по 3-5 минут в 70%;96%;100% спирте. Все просветляющие вещества обладают теми или иными неблагоприятными свойствами: вызывают пожелтение препаратов, сильно морщат срезы, извлекают синтетические (анилиновые) красители из тканей. Например, наиболее часто применяемые карбол-ксилол и карбол-толуол быстро и хорошо просветляют срезы, но вызывают их сморщивание и разрушают некоторые красители при длительном хранении препарата. Поэтому просветление в этих средах не должно превышать 3 минут, после чего срезы отмывают в течении 2-3 минут в двух порциях чистого ксилола или толуола. В том случае, если срез при перенесении в карбол – ксилол и карбол – толуол помутнел (в нем появляются при этом матовые непрозрачные участки), его необходимо вновь поместить в абсолютный спирт для окончательного обезвоживания, а затем повторно просветлить.
Схема просветления срезов выглядит так:
-
Спирт 70%
3-5 минут
Спирт 96%
3-5 минут
Спирт 100%
3-5 минут
Карбол - ксилол
3 минуты
Ксилол I
3 минуты
Ксилол II
3 минуты
При переносе срезов из одной жидкости в другую необходимо, чтобы последующая порция не загрязнялась предыдущей. Особенно важно соблюдать это условие при переносе препаратов из спирта в ксилол. Поэтому жидкости дают хорошенько стечь, а если стекла сложены попарно, их обязательно при этом разъединяют и вытирают обратную сторону фильтровальной бумагой или тряпочкой. Однако не следует долго держать срезы на воздухе, так как они при этом подсыхают и портятся.Можно производить обезвоживание и просветление как свободноплавающих срезов, так и наклеенных на стёкла. Однако при нахождении свободноплавающих срезов в крепких спиртах и карбол – ксилоле они сморщиваются и становятся хрупкими.