Характеристика основных типов красителей
Именно на электролитических свойствах основано разделение применяемых в гистологической практике красителей на три группы: основные, кислотные и нейтральные. Большинство структур в какой-то степени окрашивается и кислыми и основными красителями, но почти всегда имеет большее сродство к тем или другим. Этим и пользуются для того, чтобы четче выявить различные детали в строении препарата. В некоторых случаях неодинаковая окраска различных частей зависит не от типа красителя, а от того, пропитывает ли краситель структуру или осаждается на её поверхности.Основные красители представляют собой красящее основание или его соль и окрашивают клеточные и тканевые структуры кислой природы.Структуры, красящиеся основными красителями называются базофильными, т.е. любящие основные краски. К основным красителям относятся гематоксилин, тионин, метиловый зеленый, метиловый синий, кармин.Кислые красители – кислоты и их соли, в силу чего они окрашивают вещества и частицы основной природы, например, гранулы эозинофильных лейкоцитов, цитоплазму клеток. Образования, окрашивающиеся ими, называются оксифильными.В эту группу красителей входит эозин, эритрозин, кислотный фуксин, конго красный, оранжевый G, пикриновая кислота и др.Нейтральные красители образуются при соединении водных растворов кислотного и основного красителей (соединения красящей кислоты с красящим основанием). К этой группе относятся судан III, эозиновокислый, метиловый синий.Красители, применяемые для гистологических целей, делят на природные и искусственные.Следует помнить, что для выбора красителя важное значение имеет предшествующая обработка среза, в частности фиксация. В зависимости от того, в какой жидкости был зафиксирован кусочек органа, красители по-разному будут окрашивать одни и те же структуры. Большое значение имеет для последующей окраски и способ заливки кусочка – парафиновые и целлоидиновые срезы окрашиваются в ряде случаев неодинаково. Методы окрашивания гистологических препаратовРазличают несколько типов гистологического окрашивания: прогрессивное и регрессивное, прямое и непрямое, простое и сложное, обзорное и специальное.При прогрессивном окрашивании срез сразу же приобретает нужную степень окраски. При регрессивной окраске красители окрашивают срез более интенсивно, чем это необходимо, перекрашивают его. Такие перекрашенные срезы затем обрабатывают особым веществом, которое ослабляет окраску до желаемого тона. Применение регрессивных методов окраски требует определенного навыка, который приобретается постепенно.Прямое окрашивание - окрашивание объекта непосредственно в растворе красителя, непрямое – срез окрашивают нужным красителем лишь после предварительной обработки специальными протравными красителями.Обзорные методы используются для получения общего ориентировочного представления об изучаемом объекте.Специальные позволяют окрашивать именно те тканевые клеточные элементы, которые интересуют исследователя (органеллы, волокнистые структуры и др.).
Общие правила окрашивания гистологических препаратовКрасящие растворы должны быть чистыми, поэтому любой краситель необходимо перед употреблением отфильтровать, а водный раствор красителя готовить только на дистиллированной воде;Отдавать предпочтение окрашиванию красителями низкой концентрации в течении длительного времени перед кратковременной окраской красителями высокой концентрации;Отдавать предпочтение регрессивным методам, но тщательно контролировать степень ослабления окраски отмывающей жидкостью - дифференцировку;Тщательно удалять отмывающую жидкость при окрашивании регрессивными методами (в противном случае она будет продолжать действовать и обесцветит срез);Предпочтительно применять тонкие срезы, т.к. толстые затрудняют дифференцировку и приводят к неравномерной окраске ткани;Окраску проводить под контролем микроскопа при слабом увеличении.Чаще сначала окрашивают ядра, а потом цитоплазму;Перед перенесением во второй краситель, как правило, срез отмывают от предыдущего красителя, пока от него не перестанет отходить облако предыдущего красителя.Окраске подвергают как наклеенные на стекла, так и свободно плавающие срезы. В первом случае употребляют биологические стаканчики, высокие бюксы, специальные кюветы.Чтобы увеличить пропускную способность, стекла со срезами складывают попарно спинками друг к другу и располагают в виде треугольника.При переносе срезов из одного раствора в другой необходимо следить за тем, чтобы последующая порция жидкости как можно меньше загрязнялась предыдущей.Посуда должна быть четко этикетирована и расставлена в определенном порядке обеспечивающем нужную последовательность работы. Необходимо своевременно менять растворы, не допуская их чрезмерного загрязнения.