Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Bibi.doc
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
391.17 Кб
Скачать

53. Принципы генной инженерии. Ферменты, используемые в генной инженерии.

Генная инженерия – это набор специальных методов для создания генно-инженерных конструкции.

Принципы: Конструирование рекомбинантных молекул ДНК; Перенос ДНК в клетки реципиенты; Селекция и отбор трансформированных клеток; Клонирование рекомбинантной ДНК в клетках хозяина.

Ферменты: эндонуклеазы рестрикции, ДНК-лигазы, обратная транскриптаза, концевая трансфераза, Taq-полимераза, ДНК-полимераза 1 (фрагмент Кленова), РНКаза H .

54.Создание рекомбинантных днк (понятия вектор, вставка). Принципы молекулярного клонирования в составе генетического вектора.

Концепция создания рекомбинантной ДНК: вектор-вставка. Вставка – это чужеродная ДНК, встроенная в вектор

Вектор – это молекула ДНК, которую используют для переноса рекомбинантной ДНК в клетку-хозяина с целью ее размножения и клонирования.

Для вставки используют: геномную ДНК, выделенную из клеток; гены, синтезированные в пробирке; копии ДНК, полученные с помощью фермента обратной транскриптазы на РНК- матрице.

Характеристика вектора: вектор должен содержать точку начала репликации (origin) для самостоятельной репликации в клетке-хозяине; вектор должен иметь два селективных маркера для отбора и клонирования трансформированных клеток хозяина. В качестве векторов используют: плазмиды, вирусы, космиды (плазмиды, которые содержат cos-сайты фага l), бактериофаги, Yac (yeast artificial chromosomes) – искусственные хромосомы дрожжей.

Принципы молекулярного клонирования:

Клонирование – это получение большого количества копий определенного гена в результате его размножения в клетках в составе рекомбинантной ДНК

Клонирование фрагмента ДНК включает несколько последовательных этапов:

1) встраивание клонируемого (чужеродного) фрагмента ДНК в векторную молекулу ДНК (образование химерной молекулы - рекомбинантной ДНК);

2) проникновение этой конструкции в бактериальную клетку-хозяина;

  1. идентификация клеток, содержащих рекомбинантную ДНК, и их отбор (как правило, осуществляется на селективной среде);

  2. получение необходимого количества клеток, содержащих рекомбинантную ДНК (собственно клонирование). При необходимости индуцируют экспрессию клонированного гена в клетках-хозяевах и получают кодируемый им белок.

55. Принципы генной терапии (создание генных конструкций и методы их доставки в клетки мишени).

Генная терапия – коррекция мутантных генов или нарушений клеточных функций с помощью методов генной инженерии. Генная терапия на уровне половых и зародышевых клеток не проводится . Генотерапия основана на введении нормальной копии гена в соматические клетки.

Терапевтическая генно-инженерная конструкция содержит: терапевтический ген для коррекции мутантного гена; подходящий вектор; тканеспецифический промотор; селективный маркер для отбора трансформированных клеток

Методы доставки генно-инженерных конструкций в клетки-мишени:

  • Физические методы: микроинъекция, электропорация (высокое напряжение увеличивает проницаемость мемраны), с помощью аэрозолей.

  • Биологические методы: липосомы, эндоцитоз, нановекторы на основе желатина.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]