Выделение

При выделении сердечных гликозидов используются органиче­ские растворители (этиловый, метиловый спирты), которые не вызы­вают гидролиза сердечных гликозидов. Выделение сердечных глико­зидов состоит из следующих стадий:

1. Экстракции сердечных гликозидов из растительного сырья.

2. Очистки полученного извлечения.

1. Разделения суммы сердечных гликозидов (колоночная и пре­паративная хроматографии).

Полученное спиртовое извлечение, содержащее сумму сердечных гликозидов, подвергают очистке от сопутствующих веществ липо-фильного характера (хлорофилл, каротиноиды, смолы, масла и др ор­ганические вещества, растворимые в спиртах). Для очистки упаренное под вакуумом (t 50-52°C) спиртовое извлечение подвергают много­кратной обработке органическими растворителями, чаще всего CCl₄ или же применяют сорбционные методы очистки.

Разделение суммы сердечных гликозидов проводят чаще всего на хроматографических колонках, заполненных сорбентами (оксид алю­миния, силикагель). В дальнейшем нужные зоны элюируют опреде­ленными растворителями.

Качественное определение

Качественные реакции проводят или с индивидуальными вещест­вами или с очищенным извлечением из растительного сырья. С этой целью несколько капель извлечения упаривают досуха на часовом стекле или в выпарительной чашке, сухой остаток растворяют в нуж­ном растворителе.

Все реакции на сердечные гликозиды условно разделяют на 3 группы:

1. Реакции на углеводную часть молекулы (2-дезоксисахара): Реакция Келлер-Килиани.

Готовят два раствора:

1. ледяная уксусная кислота, содержащая следы Fe₂(S0₄)₃.

2. концентрированная серная кислота также со следами Fe₂(S0₄)₃ Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в растворе 1 и

осторожно по стенке вливают раствор 2. При наличии дезоксисахаров

образуется бурое кольцо, а верхний слой через некоторое время окра­сится в васильково-синий цвет.

Ксантгидрольная реакция (реакция Пезеца).

При нагревании ксантгидрола (дибензо-у-пиранола) с испытуе­мым гликозидом в присутствии ледяной уксусной кислоты и после­дующем прибавлении нескольких капель серной или фосфорной ки­слоты появляется красное окрашивание.

2. Реакции на стероидное ядро: Реакция Либермана-Бурхардта.

Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в ледяной ук­сусной кислоте и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентри­рованной серной кислоты (50:1). Через некоторое время появляется окраска: от розовой к зеленой и синей.

Реакция Розенгейма.

Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в хлороформе и смешивают с 90% водным раствором трихлоруксусной кислоты. Появляются сменяющие друг друга окраски: до лиловой и синей.

3. Реакции на пятичленное ненасыщенное лактонное кольцо: Для установления наличия пятичленного лактонного кольца про­ водят реакции с ароматическими нитрозпроизводными в щелочной среде, с которыми СГ образуют окрашенные продукты:

а) реакция Легаля - с нитропруссидом натрия - быстро исче­зающее красное окрашивание;

б) реакция Кедде - с 3,5-динитробензойной кислотой - красно-фиолетовое окрашивание;

в) реакция Бальета - с пикриновой кислотой - оранжевое окра­шивание.

На шестичленное лактонное кольцо не найдены достаточно спе­цифические реактивы. Для подтверждения шестичленного лактонного кольца в буфадиенолидах в качестве реактива применяют раствор треххлористой сурьмы. Для этого гликозид растворяют в хлороформе и добавляют постепенно насыщенный раствор треххлористой сурьмы. При нагревании образуется лиловое окрашивание. Раствор треххлори­стой сурьмы в хлороформе используется для обнаружения буфадие-нолидов на хроматограммах.

Реакция Татье.

К спиртовому извлечению прибавляют 2-3 капли концентриро­ванной соляной кислоты со следами хлорида железа (III) и нагревают. Агликоны буфадиенолидов дают красное окрашивание.

Хроматографический метод анализа

1. Лантозиды наперстянки шерстистой.

Хроматография проводится в тонком слое сорбента (тальк). На стартовую линию на расстоянии 1,5 см от нижнего края наносят пятна раствора гликозидов по 0,01 мл и пятна свидетелей. Пластинку поме­щают в камеру и хроматографируют восходящим способом 30-35 мин. Длина пробега подвижной фазы не менее 12 см. В качестве подвиж­ной фазы используется система: ХЛОРОФОРМ - ЭТИЛОВЫЙ СПИРТ - БЕНЗОЛ - ФОРМАМИД (59:10:30:1).

Пластинку высушивают на воздухе 5 мин, затем 10 мин. в су­шильном шкафу при температуре - 120°С. Пластинку обрабатывают 25% раствором трихлоруксусной кислоты в этиловом спирте с добав­лением 0,2% раствора хлорамина Т. После обработки пластинку вы­сушивают 10 мин. в сушильном шкафу при температуре 120°С. Лан­тозиды А, В, С проявляются в виде пятен серо-синего цвета. В УФ -свете лантозид А обладает ярко-желтой флуоресценцией; В - зелено­вато-голубой; С - голубой.