45. Адаптація (еквілібрація) розрідженої сперми перед заморожуванням.

Еквілібрація – період адаптації сперми до заморожування. Період адаптації залежить від типу заморожування.

4. Середні якісні показники заморожено-розмороженої сперми при різних способах розрідження сперми (n = 10) Наукова література теж містить дані про те, що оптимальною температурою для розбавлення сперми розріджувачем з гліцерином є температура 2-5˚С, а не 35-37˚С (О.Д. Бугров, 1965; І.В. Смирнов, 1976). Визначення періоду еквілібрації. Згідно з інструкцією, перед заморожуванням сперми у гранулах об’ємом 0,1-0,2 мл період еквілібрації становить 3-4 години. Сперма, еквілібрована 5 і 6 годин, достовірно краща від тієї, що була еквілібрована 3, 4 і 7 годин. При цьому різниця за рухливістю склала від 0,4 до 0,8 бала, за виживаністю - від 0,5 до 1,5 години, АПВ – від 2,7 до 5,4 умовної одиниці (Р<0,001…0,05). Таким чином, оптимальний період еквілібрації – 5-6 годин.

46. Поняття про температурний шок («холодовий удар») сперміїв.

Температура є одним із активних факторів навколишнього середовища сперміїв. Іванов стверджував, що зниження темп. продовжує життя сперміям. Саме при низьких тем можливе тривале зберігання сперміїв без втрати ним запліднюючої здатності. Але при швидкому охолоджені спостерігається «холодовий удар»- не зворотне зниження рухливості сперміїв і навіть загибелі при швидкому охолоджені до 0. Поява холодового удару спостерігається при охолоджені до +17. Шоковий поріг знаходиться від+12 до +5. Чутливість сперміїв не зникає при зберіганні 37-40гр. І.В. Смірнов пояснює холодовий удар невідповідністю між значною активізацією обміну речовин сперміїв і затвердінням основного субстрату їх метаболізму. Для профілактики застосовують повільне охолодження сперми , вводять в сперму фосфоліпіди , здійснюють витримку сперміїв перед охолодженням.

47. Техніка заморожування сперми бугаїв на второ пластовій пластині в парах рідкого азоту.

Заморожування у формі гранул, розділяють 1 :1 , середовище 11% р-р лактози 81,5мл, 15мл –жовтка, 3.5мл гліцерину. Доводять до 1 мл -100млн.активних сперміїв Розбавлену до холодильник при т.-2-4 витримують 4 -7 год. Для адаптації, стабільності і еквілібрації, вносячи в лунки фторопластові пластинки (в сосуд з рідким азотом і охолоджують до зупинки кипіння азоту). Охолоджують пластинку за допомогою шприца-піпетки в лунку через 2-4 хв. Пластинку в рідкий азот на 2хв. Гранули збирають в пластмасовий стаканчик(мішечки з тканини), фіксують ниткою і опускають донизу в посуд Дюара з рідким азотом для довго зберігання. До вільного краю кріплять етикетку.

48. Правила розрідження сперми.

- дотримання стерильності

- врахування осмотичного тиску розбавника Розбавляють сперму через 30-60 хвилин після отримання

та визначення її якості в лабораторії. Для розбавлення використовується сперма з концентрацією 100

млн/мл і більше з рухливістю сперміїв не менше восьми балів.

Температура середовища перед розбавленням повинна бути однаковою зі спермою. Середовище обережно підливають до сперми невеликими порціями, постійно змішуючи її. Після розбавлення сперми визначають рухливість сперміїв під мікроскопом. Сперму кнурів розбавляють синтетичними середовищами (розведення від 1:1 до 1:5 у залежності від рухливості та концентрації сперміїв) з таким розрахунком, щоб у 1 мл містилось

40-50 млн.