
- •Классификация хроматографических методов анализа.
- •Предпосылки использования хроматографии в биологии.
- •Газовая хроматография, как метод анализа биологических объектов.
- •Анализ жирных кислот и микроорганизмов.
- •Пиролиз микроорганизмов.
- •Сорбенты в эксклюзионной жидкостной биохроматографии.
- •Определение молекулярной массы белка с помощью экслюзионной жидкостной биохроматографии.
- •Ионообменная жидкостная биохроматография.
- •Область применения и объект изучения.
- •Неподвижная фаза.
- •Подвижная фаза.
- •Детекторы в ионообменной хроматографии
- •Разновидности сорбентов в тонкослойной хроматографии.
- •Электрофорез в биологии.
- •Электрофорез нуклеиновых кислот.
- •Выводы.
- •Список использованной литературы.
Область применения и объект изучения.
Область применения
Экологические предприятия
Технологические среды
Рутинный анализ водных систем (мониторинг чистоты питьевой воды)
Ультраследовой анализ химических элементов
Определяемые вещества разделяемой смеси (объект изучения):
Продукты различных производств: медицины, ядерной физики.
Анионы неорганических кислот (HСl, HNO3, H2S, H3BO3 и др.).
Оксоанионы хлора, брома, иода и некоторых металлов.
Оксиды азота, серы и фосфора.
Моно- и дикарбоновые кислоты.
Катионы щелочных, щелочноземельных и переходных элементов.
Анионные и катионные комплексы металлов.
Алифатические и ароматические амины.
Фенолы и их производные.
Применение ионообменной жидкостной хроматографии в биологии:
Разделение заряженных биополимеров (белков, нуклеиновых кислот) в буферных растворах с фиксированной рН средой
Неподвижная фаза.
В настоящее время в ионной хроматографии применяются два типа неподвижных фаз: ионообменники с функциональными группами на поверхности и объемно-пористые ионообменники. В первом типе материалов функциональные группы расположены непосредственно на поверхности полимера или в его порах; объемно-пористые материалы имеют очень маленькие частицы (также с функциональными группами на поверхности), которые присоединены к центральной частице, имеющей большие размеры. Это присоединение может быть осуществлено либо за счет механических, либо за счет гидрофобных или электростатических взаимодействий. В качестве функциональных групп чаще выбирают аммониевые группы, они обладают хорошей химической стабильностью и практически неограниченным числом возможных заместителей у атома азота.
Требования к сорбенту:
сорбент должен иметь низкую ионообменную емкость (0.001-0.1 мэкв/г). Чтобы обеспечить низкий фоновый сигнал в ионной хроматографии используют элюенты (растворы кислот, солей, оснований) с концентрацией менее 0.01 М. Для эффективного разделения с помощью таких элюентов требуются низкоемкостные ионообменные сорбенты;
Диаметр зерен сорбента не должен превышать 20 мкм (обычно он равен 5–10 мкм). Только в этом случае можно достичь высокой эффективности разделения;
Зерна сорбента должны обладать высокой механической прочностью и устойчивостью к давлению, которое возникает при работе с мелкодисперсной неподвижной фазой;
Сорбент должен обладать высокой химической устойчивостью по отношению к элюирующему раствору. Он должен сохранять стабильность в широком интервале рН.
Список сорбентов, применяемых в ионообменной хроматографии:
Модифицированные органические полимерные смолы.
Модифицированные силикагели.
Неорганические соли (полифосфаты и др.).
Стекла.
Цеолиты.
Оксиды металлов (Al2О3 и др.).
Производные целлюлозы.
Подвижная фаза.
Требования к элюенту:
Быстрое и селективное разделение определяемых ионов в разделяющей колонке;
Превращение элюента после прохождения подавляющей системы в соединение с электропроводностью максимально отличной от электропроводности определяемого иона;
Элюент не должен задерживать сорбируемость наиболее сорбируемого определяемого иона на более чем 25 минут;
Концентрация элюента 1 М – 1мМ.
Элюенты, используемые в одноколончатой ионной хроматографии анионов:
Сульфаниловая
Никотиновая
Пиколиновая
Лимонная
Янтарная
Фумаровая
Сульфосалициловая
n -Аминобензойная
Бензолсульфоновая
3,5-Диоксибензойная
Дипиколиновая
2,4-Диоксибензойная
1 3,5-Бензолтрикарбоновая
Фталевая
Бензойная
Салициловая
n- Нитробензойная
Элюенты, используемые в двухколончатой ионной хроматографии анионов:
NaOH
Na2B4O7
Na2CO3
NaHCO3 / Na2CO3
Na2CO3 / NaOH
NaNO3 / NaOH
C6H5ONa
Аминокислота