Сорбенты в эксклюзионной жидкостной биохроматографии.

В эксклюзионной хроматографии используются гидрофильные и органофильные гели. К первым относятся декстрановые гели – полисахаридные цепи, сшитые эпихлоригидрином. Матрица из таких цепей хорошо удерживает воду, она способна набухать, вследствие чего размер пор уменьшается и избирательная способность сорбента меняется (фильтруются более мелкие молекулы). Органогенные гели – производные декстрана и полистирольных групп, сохраняющие гидрофильность исходных веществ и приобретающие новые свойства – липофилию. Это последнее свойство сорбента позволяет регулировать режим работы с элюатом. Избирательное изъятие из жидкой фазы полярных молекул растворителя внутрь гранул позволяет управлять степенью адсорбции и переходить на режим виртуальной адсорбирующей хроматографии на базе эксклюзионного типа хроматографирования.

Определение молекулярной массы белка с помощью экслюзионной жидкостной биохроматографии.

Определение молекулярной массы полимеров ведется по принципу: чем больше молекулярная масса, тем интенсивнее элюция (возврат сорбата в объем элюента – в подвижную фазу). Результаты биохроматографии сравниваются с уже существующими гель-проникающими хроматограммами. Часто определяемые белки: фиброген, ферритин, уреаза, каталаза, бычий сывороточный альбумин, цитохром С.

Преимущества:

1. Определение формы молекулы (!) по гидродинамическому поведению в жидкой фазе;

2. Учет стоксового радиуса молекулы (ее размеров и формы) при обработке результатов хроматографического анализа.

Недостатки:

1. Скорость движения молекулы белка по колонке не всегда соответствует его молекулярной массе, это объясняется разной плотностью белков, однако зачастую этот показатель колеблется в пределах среднего показателя.

2. Различная структура молекулы перекрывает по своей значимости характеристики молекулярной массы и плотности, мешая тем самым достичь информативного результата – цели – определить молекулярную массу белка.

Ионообменная жидкостная биохроматография.

Ионообменная хроматография является методом разделения веществ по их способности мигрировать по ионообменной колонке или по пластине, покрытой ионо-обменником (матрица, несущая связанные ионогенные группы). Ионы разделяются в результате ионообменных реакций ионообменником, характерных для каждого типа ионов. Скорость продвижения компонентов смеси можно изменять путем регуляции рН среды, либо добавлением посторонних ионов в подвижную фазу. В последнем случае увеличивается конкуренция ионов ионита с ионами раствора (элюента), где среди ионов ионообменника числятся и сорбированные сорбаты. Десорбция учащается – движение компонентов смеси по колонки ускоряется.

• Иониты (ионообменники) – твердые или жидкие вещества, способные к обмену с ионами противоположной фазы.

Достоинства ионообменной хроматографии:

1. Возможность определять большое число неорганических и органических ионов, а также одновременно определять катионы и анионы;

2. Высокая чувствительность определения;

3. Высокая селективность и экспрессность;

4. Малый объем анализируемой пробы;

5. Широкий диапазон определяемых концентраций;

6. Возможность использования различных детекторов и их комбинаций, что позволяет обеспечить селективность и малое время определения;

7. Возможность полной автоматизации определения;

8. Во многих случаях полное отсутствие предварительной пробоподготовки.

Недостатки:

1. Поиск оптимальной для разделения целевых компонентов смеси ионной силы в системе «элюент-сорбент»;

2. Не всегда удается элюировать все компоненты смеси.