
- •1. Огляд літератури
- •1.1. Систематичне положення грибів роду Candida
- •1.2. Основні біологічні властивості грибів роду Candida
- •1.3. Антигенна структура грибів роду Candida
- •1.5. Клініка, патогенез і епідеміологія
- •2. Матеріали і методи дослідження
- •2.1. Методика дослідження морфології клітин
- •2.2. Методика дослідження культуральних властивостей
- •3. Результати досліджень та їх обговорення
- •Узагальнення
- •Цитована література
1.2. Основні біологічні властивості грибів роду Candida
Рід Candida об'єднує гетерогенну групу аспорогенних дріжджів, що стабілізувалися в гаплоїдному стані і втратили здатність до спарювання з подальшим утворенням статевих спор [14].
Морфологічно дріжджоподібні гриби роду Candida представляють собою одноклітинні мікроорганізми. Форма клітин округла, видовжена або овальна, розміри коливаються від 2 - 5 мкм у діаметрі в молодих клітинах, до 12 - 16 мкм у старих. У клітці є шестишарова клітинна стінка, цитоплазматична мембрана, цитоплазма з розетками глікогену і великою кількістю рибосом, центральну і кілька дрібних вакуолей, мітохондрії, велике ядро, обмежене мембраною, в цитоплазмі визначаються різноманітні включення (волютину, жироподібних речовин та інше)[2, 26].
Особливістю дріжджоподібних грибів роду Candida є наявність тільки однієї форми розмноження - брунькування. При брунькуванні на кінці клітини утворюється одне або декілька випинань, у які надходить вміст материнської клітини (ядра, цитоплазми і т. п.). Потім тут утворюються округлі або овальні клітини (бруньки), які послідовно перетворюються в нові клітини гриба (бластоспори). Бластоспори або відокремлюються від материнської клітини, або залишаються у зв'язку з нею. Іншою характерною особливістю дріжджоподібних грибів є утворення псевдоміцелія. Бластоспори за рахунок послідовного бічного або кінцевого брунькування утворюють нитки, що складаються з витягнутих у довжину дріжджових клітин, дотичних один з одною вузькою підставою. Псевдоміцелій відрізняється від істинного міцелію тим, що його нитки не мають загальної оболонки і перегородок. По ходу псевдоміцелія можуть утворюватися гломерули - округлі грони з безліччю дріжджоподібних клітин. Псевдоміцелій зустрічається у більшості видів, деякі з них (С. albicans) утворюють кінцеві хламідоспори [14]. Хламідоспори - це спори гриба, що мають подвійну оболонку. Вони, як правило, виявляються при дослідженні мазків з колоній гриба, які виросли на поживних середовищах при бактеріологічному дослідженні, але виявляються і в біоматеріалі, отриманому з вогнища ураження. Деякі види дріжджоподібних грибів у певних умовах можуть утворювати істинний міцелій [37].
Дріжджоподібним грибам роду Candida властиве явище диморфізму: вони можуть зустрічатися як у вигляді бластоспор (дріжджова фаза), так і у вигляді коротких і довгих ниток (міцеліальна фаза) [22]. Перехід в міцеліальну фазу може спостерігатися при культивуванні при більш низькій температурі (22-25 оC) або при виснаженні живильного середовища. In vivo перехід дріжджової фази в міцеліальну може спостерігатися при проростанні в тканини організму [19].
При забарвленні за Грамом забарвлені повністю або нерівномірно темно-фіолетові клітини гриба кандида можуть розташовуватися серед нечисленних грамнегативних рожевих примірників. При фарбуванні за Романовським - Гімза або Папергейму клітини дріжджоподібних грибів забарвлюються в рожево-фіолетовий колір, іноді з червоною хроматиновою речовиною або темно-фіолетовими зернами волютіну. Часто дріжджоподібні клітини забарвлені в рівномірний фіолетовий колір. Молоді клітини мають круглу або яйцевидну форму діаметром 0,5-5 мкм. розташовуються поодиноко або гроноподібна. Зрілі клітини мають видовжену форму [36, 37].
Колонії грибів роду Candida великі, круглі, сметаноподібної консістенції, білуваті або сіро-жовті, блискучі, з відгалуженнями в живильне середовище. При мікроскопії колонія складається з овальних клітин, що брунькуються, розміром 6 - 10 мкм у діаметрі. На периферії колоній можуть зустрічатися нитки псевдоміцелія. На рисовому агарі у гриба утворюються товстостінні хламідоспори.
Гриби роду Candida не утворюють каротиноподібних пігментів і не формують капсул. Крім хламідоспор, що є ознакою тільки С. albicans, гриби роду Candida інших видів спор не утворюють.
Дріжджоподібні гриби - факультативні анаероби, при цьому анаеробний метаболізм особливо характерний для нитчастої фази. У складі клітинної стінки переважають вуглеводи (92 %), серед яких маноза становить 86 %, глюкоза – 6 %, при цьому 96 % вуглеводів пов'язані з білками глікозидазними зв'язками. В якості мінорних компонентів містяться Д-галактоза, Д-ксилоза і фосфат, білки становлять лише 7 %. Клітинна стінка містить хітин, концентрація якого вище у міцелія. Для живлення їх з азотистих речовин використовуються білки, пептони та амінокислоти; вони досить добре ростуть на кров'яних і сироваткових середовищах, на гідролізаті дріжджів. Найбільш відповідними з вуглеводів є глюкоза, левулоза, мальтоза, лактоза.
Оптимальна температура росту грибів роду Candida 25 - 28 °С, вони можуть переживати в діапазоні температур від 5 ° до 40 °С. Оптимум рН - 5,8-6,5, але зростання можливе і при більш кислої реакції середовища.
Найбільш поширеними середовищами для вирощування кандидозних грибів є: середовище Сабуро (мальтоза або глюкоза-40, 0г, пептони-10, 0г, вода-1000мл, агар-20,0 г), пивне сусло-агар, м’ясо-пептонний глюкозний (2-4 %) агар, рідке сусло, рідке середовище Сабуро. Середа Чапека-Докса з додаванням твін-80, картопляно-морквяний агар з жовчю, рисовий агар найбільш придатні для виявлення хламідоспор і псевдоміцелію грибів [14, 22].
Одним із способів визначення видової приналежності грибів роду Candida є дослідження біохімічної (ферментативної) активності методом «строкатого ряду». Для визначення використовують 2 % розчини вуглеводів (трегалоза, глюкоза, галактоза, мальтоза, лактоза, сахароза). Видову приналежність оцінюють по зміні забарвлення дослідного розчину в порівнянні з контролем. Докладні дані про біохімічну активність (ферментація і окислення) кандидозних грибів наведені в таблицях 1, 2 [3, 14, 15].
Кандидозні гриби (в культурах) роками зберігають свою життєздатність у висушеному стані, переносять багаторазове заморожування і відтавання у воді
Таблиця 1
Ферментативні властивості грибів роду Candida
ВИД |
ВУГЛЕВОД |
|||||
глюкоза |
мальтоза |
цукроза |
лактоза |
галактоза |
трегалоза |
|
1. C. albicans |
+ |
+ |
-(+) |
- |
+ |
+ |
2. C. tropicalis |
+ |
+ |
+(-) |
- |
+ |
+ |
3. C. krusei |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
4. C. kefyr |
+ |
- |
+ |
в |
+ |
- |
5. C. parapsilosis |
+ |
-(+m) |
-(+с) |
- |
в |
- |
6. C. guilliermondii |
+ |
- |
+ |
- |
в |
+ |
7. C. catenulata |
в |
- |
- |
- |
- |
- |
8. C. glabrata |
+ |
- |
- |
- |
- |
+(с) |
9. C. lambica |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
10. C. lusitaniae |
+ |
-(+в,с) |
+(m) |
- |
в |
+ |
11. C. rugosa |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
12. C. utilis |
+ |
- |
+ |
- |
- |
- |
13. C. viswanathii |
+ |
+ |
-(+m) |
- |
+(m) |
+(с) |
14.C.zeylanoides |
-(+m) |
- |
- |
- |
- |
-(+m) |
Умовні позначення : +(-) – реакція позитивна, але у деякіх штамів негативна; -(+) – реакція негативна, але у деякіх штамів позитивна; В – активність варіює у різних штамів; С – реакція слабо виражена; m – реакція уповільнена, проявляється після 7 днів.
Таблиця 2
та грунті; витримують конкуренцію з багатьма мікроорганізмами на різних харчових продуктах, наприклад в кислому молоці, квашеній капусті, фруктових соках і т.д. У культурах і патологічному матеріалі вони гинуть при кип'ятінні протягом декількох хвилин. Одноразове заморожування не надає згубної дії; ліофільне заморожування вони переносять роками; повторне заморожування і відтавання з короткими інтервалами призводить до загибелі культури протягом кількох годин. З хімічних речовин згубну дію надають 2-5 % розчини фенолу і формаліну, хлораміну, лізолу, борати і йодиди, сульфат міді та цинку, перманганат калію. У великих розведеннях (1:2000 і більше) органічні барвники: діамантовий зелений, фуксин, генціанвіолет, комплексні препарати ртуті та срібла - придушують життєздатність кандидозних грибів. Багато антибіотиків подавляють життєздатність кандидозних грибів (ністатин, леворин, амфотерицин В, флуконазол та ін.) [19, 20, 43].