24.Гистоны. Структура нуклеосом.

Гистоны белки с молекул массой 11-21 кДа, содержат много остатков аргинина и лизина. Существует 5 типов гистонов. 4 гистона Н2а, Н2в,Н3,Н4. Комплекс гистонов с ДНК служит основной структурной ед хроматина и наз нуклеосома. Нуклеосома состоит из кора и намотанной на него ДНК. Кор представляет собой гистоновый октамер Н2а, Н2в,Н3,Н4.Гистон Н1 находиться над 2мя нуклеосомами и соеденяет их мостиком

25.Уровни упаковки хромасом эукариот. Конденсация хроматина.

Хр-ма состоит из 2х компонентов ДНК и гистонов (Н,Н2а,Н2в,Н3,Н4)гистоны формируют нуклеосому (комплекс гистонов с ДНК).Молекула ДНК оплетает этот нуклеотид, с гистоном контактирует 141-146нктд.Компактизация мол ДНК в хр-ме начинается с того что Н1, который находиться над 2мя нуклеосомами, сжимается и подтягивает одну нуклеосому к другой. Образуется первичная нуклеосомная нить диаметром 11нм.След уровень компактизации связан с формированием соленоидной нити, 6 нуклеосом в одной плоскости, след. пластина еще 6 нуклеосом и тд.образуется нить 30нм.

3й этап упаковки ДНК в хр-е связан с формированием петльных доменов первого порядка. Это петли куда входит около 20тыс нктд петля удерживается нуклеосомными белками.4ый этап это формирование петельных доменов 2го порядка. Образуются гигантские петли 60-80 нктд.5ый уровень связан с тем что в центре хроматиды располагаются металлопротеины и образуется петли концы которых фиксируются внутри металлопротеинов, эту стр-ру наз хромосомы типа ламповых щеток. Благодоря уровням компактизации дл хр-мы укорачивается.

Конденсация хроматина – это уплотнение хроматина хр-м, плотные хр-мы распред. между 2мя дочерними клетками веретеном деления.

26.Приготовление хромосомных препаратов. Использование колхицина. Гипотония, фиксация и окрашивание

Анализ кариотипа человека проводят в культуре делящихся соматических и половых клеток. Чаще всего используют культуру клеток периферической крови, прежде всего лимфоцитов. Костного мозга и фибробластов. Цитогенетический анализ вкл 3 основных этапа

1.культивирование клеток

2.окраску препарата

3. микроскопический анализ

Для увеличения кол-ва метафазных клеток за полтора часа до окончания культивирования в культуру вводят колхицин, он разрушает клеточное веретено, приостанавливает деление клеток на стадии метафазы и увеличивает конденсацию хр-м. После культивирования клетки помещают в гипотонический раствор KCL или NCL.Гипотония приводит к разрыву ядерной оболочки и межхромосомных связей и свободному перемещению хр-м в цитоплазме. После производят фиксацию клеток смесью спирта и уксуса. Затем суспензию раскапывают на предметные стекла и высушивают на воздухе.

Окраска- производиться в зависимости от целей исследования. Наиболее простой метод окрашивания наз рутинным. Применяется для определения кол-ва хр-м. При этой окр-ке исп краситель Гимза, он равномерно окрашивает хр-мы, что дает возможность идентифицировать их и определить число. Использование этого метода не позволяет выявлять структурные перестройки хр-м, в этих случаях применяют дифференциальные окраски хр-м. G метод- используют тж краситель Гимза, но, хр-мы предварительно обрабатывают трипсином. Она выявляет участки объединенные генами. содержащие повышенное кол-во А и Т. Q – окраска использ. флуоресцирующий краситель. По результатам этой окраски идентифицируют каждую пару гомологов. С – окраска основана на тепловой денатурации и послед. ренатурации ДНК, позволяет анализировать лишь гетерохроматиновые участки.

Метод гибридизации клеток чел. и мыши - позволяет определить гены которые находятся в хр-ме. Если в культуру + вирус сендай, то он связывает 2 клетки вместе. Когда стали культивировать вместе культ. мыши и чел. вирус стал образовывать дикарионы. Ядра кл-ок начинают встраиваться в митоз, у мыши 40 хр-м у чел 46 хр-м, при делении эти хр-мы смешивались, такая смесь наз синкарион. После из синкариона начинаеться выброс клеток хр-мы чел и образуются клетки которые имеют 40 хр-м мыши и 1 чел. Смотрят, что лишнего выпускает эта клетка относительно мышиной, что лишнего выпускает кл-ка сод 1 хр-му чел.