Диагностика

Диагноз ставят на основании клинических, эпизоотологических данных и лабораторных методов исследования. Однако эпизоотологические данные, симптомы болезни и характер патологических изменений дают основание лишь заподозрить болезнь. Поскольку ВД-БС напоминает многие другие болезни (чуму, инфекционный язвенный стоматит, грибковый стоматит, ПГ-3, катаральную лихорадку КРС, паратуберкулез и алиментарные отравления), лабораторные исследования в диагностике имеют решающее значение. При ди­агнозе на ВД-БС следует учитывать следующее: заболевают отдельные животные в возрасте 3-36 мес, типичные клинические изменения проявляются поражением слизистых оболочек или кровянистым поносом с эрозией или без эрозии слизистых мембран, все заболевшие животные погибают в течение нескольких дней, у больных животных нет специфических AT в крови, хотя остальное поголовье имеет их в высоких титрах.

Лабораторная диагностика ВД-БС включает: 1) обнаружение в патологическом мате­риале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных АГ в РИФ; 2) выде­ление возбудителя из патологического материала в культуре клеток ТБ, ПЭК или ЛЭК и его идентификация в РН или РИФ; 3) выявление AT в сыворотке крови больных и переболев­ших животных (ретроспективная диагностика) в РСК и РН.

Лабораторную диагностику ВД-БС проводят с использованием набора диагностикумов (ТУ 4621-529-79), выпускаемых биологической промышленностью. Ее ведут параллельно с исследованием материала на ПГ-3, аденовирусную (адено 1 и 2), PC и ИРГ. Предварительный диагноз на ВД-БС КРС ставят на основании положительных резуль­татов обнаружения АГ в патологическом материале в ИФ и ПЦР с учетом эпизоотологических и клинических данных, а также патологоанатомических изменений. Окончательный диагноз ставят на основании: совпадения результатов ИФ с ПЦР, выделением и идентифи­кацией вируса; совпадения результатов ИФ с обнаружением AT в 30% и более вторых проб парных сывороток в титрах не ниже 1:4 в РСК и 1:16 в РН; обнаружения 4-кратного и более прироста AT в парных пробах сывороток. Предварительный диагноз ставят в ветеринарных лабораториях в течение 2-3 дн, окончательный - до 30 дн.

Выделение вируса.

Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют патологический матери­ал от больных животных, взятый в первые 2-3 дня при выраженных симптомах болезни, или от животных, убитых с диагностической целью в острой стадии заболевания. От боль­ных животных берут 15-20 проб следующего материала: смывы со слизистой оболочки но­совой полости, получаемые путем введения стерильного ватно-марлевого или поролонового тампона в носовые ходы; пробы крови в первые 3 да болезни и через 3 нед от тех же живот­ных с соблюдением правил асептики в стерильные пробирки по 8-10 мл; соскобы с изъязв­ленных или эрозированных участков слизистых оболочек ротовой полости и носового зер­кала, взятые жесткими ватно-марлевыми тампонами или скальпелем. Тампоны с материа­лом помещают в стерильные пенициллиновые флаконы или пробирки с 2-3 мл стерильного физиологического р-ра или р-ра Хенкса, содержащего 500-1000 ЕД/мл антибиотиков (канамицина, мономицина, неомицина, пенициллина, стрептомицина и др.). Из крови после свертывания стерильно сливают 3-4 мл сыворотки и доставляют в лабораторию.

От животных, убитых с диагностической целью, берут с соблюдением правил асептики кусочки легких с бронхом (на границе пораженного и здорового участков), селезенки, сре-достенные, бронхиальные и брыжеечные лимфоузлы, миндалины, пораженные участки сли­зистых оболочек носовой и ротовой полостей, трахеи, ЖКТ, а также пробу крови. Кусочки материала массой до 20 г помещают в стерильную, плотно закрывающуюся посуду. Легче вирус выделить в начале болезни и в период обострения из крови, легких, различных участ­ков тонкого кишечника (в особенности из клеток слизистой оболочки 12-перстной кишки), лимфоузлов и селезенки. При хроническом течении болезни его удается регулярно выделять из разных отделов кишечника, но не из крови. Исследование носовых смывов и фекалий в этих случаях также дает отрицательные результаты, хотя в отдельных случаях вирус удава­лось выделять из фекалий даже через 5 мес после болезни. В начале болезни в период подъ­ема температуры от больных животных берут пробы крови в р-р цитрата натрия или гепа-рина и помещают их в термос со льдом. Из крови экспериментально зараженных животных выделяли вирус с 1-14-го да после заражения. Выделяли его также из тканей абортирован­ных или мертворожденных плодов, плаценты и околоплодной жидкости.

Заражение культур клеток. Вирус выделяют в первичных субкультурах клеток эм­бриона КРС (ПЭК, ЛЭК, СЭК) или ТБ. Изолят считается выделенным в случае, если он вы­зывает стабильное однотипное ЦПД не менее чем в 2-х последовательных пассажах. В этом случае возможна его идентификация в РН. В первичных культурах клеток почки эмбриона коров первые ЦПИ обнаруживают через 2-5 дн после инокуляции. Они выражаются в появ­лении мелкозернистой инфильтрации в клетках фибробластоидного типа. По мере развития инфекции клетки постепенно отторгаются от поверхности стекла, но некоторые долго со­храняются, образуя островки клеток эпителиоидного типа В конце концов на стекле остает­ся только сеть зернистого материала.

При использовании вторичных культур клеток цитопатические изменения появляются почти одновременно во всех клетках монослоя, причем они становятся удлиненными, угло­ватыми и кажутся переплетенными. В окрашенных препаратах клеточного монослоя при наличии цитопатических изменений обнаруживают вакуолизацию протоплазмы и измене­ние ядер, выражающиеся в сокращении мембраны, пикнозе и кариорексисе.