Диагностика

ИРТ диагностируют на основании клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомических изменений в органах и тканях с обязательным подтверждением лабораторными методами. Латентную инфекцию устанавливают только лабораторными исследованиями. Лабораторная диагностика включает: 1) выделение вируса из патологического материала в культуре клеток и его идентификацию в РН или РИФ; 2) обнаружение АГ вируса ИРГ в па­тологическом материале с помощью РИФ; 3) выявление AT в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в РН или РИГА. Для лабораторной диагностики ИРТ используют набор диагностикумов ИРТ КРС. Диагностику ИРТ проводят параллельно с исследованием материала на ПГ-3, аденовирусную, PC-инфекции и ВД-БС.

Предварительный ди­агноз на ИРТ КРС ставят на основании положительных результатов обнаружения АГ в па­тологическом материале РИФ с учетом эпизоотологических и клинических данных, а также патологических изменений.

Окончательный диагноз ставят на основании совпадения ре­зультатов РИФ с выделением и идентификацией вируса; совпадение результатов РИФ с об­наружением AT в 30% и более вторых проб сывороток в титрах не ниже 1:2 в РН и 1:26 в РИГА и обнаружением 4-кратного и более увеличения титра AT в парных пробах сыворо­ток. Предварительный диагноз ставят в вет лабораториях в течение 2-3 дн, окон­чательный - в течение 15-30 дн.

Выделить вирус из носовой полости, влагалища и с конъюнктивы удается с 5-го по 10-й дн, а ВНА - с 5-8-го дня после заражения. Более высокий титр AT наблюдается после 35 дн, затем начинается медленное снижение. Для выделения вируса ИРТ из бразильской спермы использовали 2 линии перевиваемых клеток МДВК и метод непрямой ИФ (67). Установле­но, что максимальное количество вируса выделяется во время подъема температуры тела на 4-7-й дн болезни и продолжался до 10-14 дн.

Индикация вируса

Обнаружение специфических телец-включений. В ядрах клеток эпителия поражен­ных слизистых оболочек носовой полости, вульвы, вагины и конъюнктивы находят специ­фические тельца-включения. Через 18-20 ч после заражения их можно обнаружить в клет­ках культуры, окрашенной гематоксилин-эозином.

Выделение вируса. Вирус выделяют в культурах клеток почек телят, почек эмбрионов телят, тестикул бычков. В настоящее время для выделения вируса ИРТ используют 2 линии клеток МДВК. В этой линии клеток выделяли вирус из бразильской коммерческой спермы с признаками ЦПЭ и подтверждением методом прямой ИФ.

Экспресс-методы индикации. Для обнаружения вируса ИРТ применен метод молекулярной гибридизации с использованием радиоак­тивно меченых ДНК-зондов. Однако более перспективным является применение нерадиоак­тивного метода детекции вирусной ДНК. Описаны выявленные последовательности BHV-1 гибридизацией in situ с помощью меченного биотином ДНК-зонда. Предложенный зонд также имел существенный недостаток, поскольку неспецифически связывался с ДНК вируса БА. Поэтому разработан нерадиоактивный метод детекции вируса ИРТ на основе высокочувствительного зонда, меченного биотином. Время тестирования биотинилированного зонда составляет около суток, что существенно меньше по сравнению с вирусологиче­ским тестированием (до 40 дн). Наиболее важным представляется использование биотинилированного ДНК-зонда в случае выявления вируса в период карантинирования вновь заве­зенных животных, а также для обнаружения заболевания на ранних стадиях и диагностики латентной формы ИРТ для выявления возможного содержания вируса ИРТ в сперме быков. Разработана также ПЦР для обнаружения герпесвируса типа 1 КРС.