Диагностика

Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных, результатов лабораторных исследований и биопробы на восприимчивых животных. Лабораторная диагностика предусматривает: выделение вируса в культуре клеток и иденти­фикация его в РН, обнаружение вирусного АГ в органах и тканях от павших и вынужденно убитых животных в РСК, РДП, ВИЭОФ, РТНГА, РИГА, РИФ, ИФА; обнаружение специ­фических AT у переболевших животных в РСК, РН, РДП, РТГА, ИФА. ПЦР экс­пресс- метод диагностики болезни и видовой дифференциации.

Выделение вируса. Взятие и подготовка материала. Материал для выделения вируса берут от больных (кровь, пунктат лимфоузлов) или убитых и павших животных (предлопаточные, мезентериальные лимфоузлы, селезенка). Патматериал берут в стерильную, плотно закрывающуюся посуду и доставляют в лабораторию нарочным в опечатанном термосе со льдом при строгом соблюдении мер предосторожности. Тепаринизированную кровь в стерильных условиях разливают по пробиркам и центрифугируют при 2500 об/мин^- 15-20 мин. Образовавшийся слой лейкоцитов между эритроцитами и плазмой в форме суспензии или пленки переносят пастеровской пипеткой в стерильный флакон. Пленку лейкоцитов отмывают от эритроцитов питательной средой и измельчают. Суспензию лейкоцитов в питательной среде используют для заражения культуры клеток. Заражать последнюю можно и цельной кровью. Вирус от больных животных выделяют прижизненно из пунктата предлопаточных лимфоузлов в инкубационный период за сутки до начала лихорадки, и на всем протя­жении болезни.

Лимфоузлы и селезенку можно хранить при -20°С в течение 60 дн., при -40°С - 6 мес., при 2-4°С - не более 7 дн. В кусочках размером 1-2 см, помещенных в 10%-ньш NaCI, вирус сохраняется при 2°С 15-30 да. Вируссодержащая цитратная кровь в условиях комнатной температуры сохраняет активность 4-6 да, при 5°С - 1 нед, при 0°С - 3-4 нед. В лиофильно высушенном материале, находящемся в ампулах под вакуумом при -20°С, вирус выживает более 5 лет, а при 2-4°С - не менее 1 года.

Заражение культуры клеток. Используют культуру клеток почки телят, которую после удаления ростовой среды заражают, нанося на слой клеток суспензию лейкоцитов исследуе­мого животного или суспензию его органов. Для адсорбции вируса культуры выдерживают 2 ч при 37° С, после чего инокулят отсасывают и вносят питательную среду с 2,5% телячьей инактивированной сыворотки. За культурой наблюдают 9-18 да. На положительный резуль­тат указывает ЦПЭ. При отсутствии ЦПЭ делают слепой пассаж. При изоляции таким методом затрачивается 20-25 да. Идентификацию проводят в РН.

Заражение восприимчивых животных. Рекомендуют заражать молодняк КРС или те­лят буйволов кровью или 10-20%-ной суспензией лимфоузлов, полученной от больных жи­вотных в первые 5 да после заболевания. Животным вводят подкожно 10 мл исследуемого материала. Это неразбавленная кровь или 10-20%-ная суспензия селезенки и лимфоузлов. На положительный результат указывает подъем температуры тела через 5 дн. после зараже­ния и последующее развитие типичной картины болезни. Смертность очень высокая - около 90%. В случае выздоровления животных дополнительным критерием специфичности тече­ния болезни является рост уровня AT.