1. Выделение гемокультуры:

1. Кровь засевают в соотношении 1:10 во флаконы со средой Раппопорт, или 10-20% желчным бульоном, или в стерильную дистиллированную (водопроводную) воду. Посевы помещают термостат при 37⁰С на 10 суток.

2.Через 24 часа делают высев из сред обогащения на ВСА (Эндо, Левина, Плоскирева) → 37⁰С 48 часов.

Примечание: Если результат первого высева будет отрицательным, через 2 суток делают второй высев на ВСА. При отрицательном результате третий высев можно делать на 5-7-ой или 10-й день.

2. Выделение копрокультуры:

1. Испражнения засевают на пластинчатые среды Эндо, Левина, Плоскирева с антибиотиком и без, СПА, которые инкубируют при 37⁰С 24 часа, и на ВСА → 37⁰С 48 часов.

2. Материал засевают на одну из сред накопления: селенитовый бульон, или бульон Мюллера, или бульон Кауфмана, или магниевую среду. При посеве на среду обогащения кусочек испражнений эмульгируют в 10мл среды. Посев инкубируют при 37⁰С 14-16 часов.

3. Выделение уринокультуры

1. 5мл мочи вносят в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при скорости 3 000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают в дезинфицирующий раствор, осадок засевают.

Примечание: можно использовать для посева нативную мочу.

2. Осадок (петлей) или нативную мочу (шпателем) засевают на пластинчатые среды и в одну из сред накопления также как испражнения.

4. Выделение биликультуры:

1. Дуоденальное содержимое (каждую из порций отдельно или их смесь) засевают в количестве 0,5 мл (шпателем) на чашку Петри с ВСА→ 37⁰С 48 часов.

2. Оставшийся материал в той же посуде ставят в термостат при 37⁰С на 10 дней, периодически (через 2 дня) производя высевы на ВСА.

II этап

1. Отобрать на чашке Петри с ВСА изолированную типичную для сальмонелл колонию, т.е. обведите её стеклографом со стороны дна чашки.

2. Часть колонии (½) пересейте на одну из сред первичной идентификации энтеробактерий: Клиглера, или Ресселя, или Олькеницкого для первичной идентификации культуры. Посев инкубируют при 37⁰С 24 часа.

3. Оставшуюся часть этой же колонии пересейте на скошенный СПА с целью выделения и накопления чистой культуры и её последующей серологической идентификации → 37⁰С 24 часа.

III этап

1. Первичная идентификация культуры по характеру роста на среде Клиглера (Ресселя).

2. Посев чистой культуры на короткий «пестрый» ряд Гисса и бульон с 2 бу-мажками (на индол и сероводород) → 37^оС 24 часа.

3. Посев на среду Симмонса → 37^оС 24 часа.

4. Посев в столбик полужидкого агара → 37^оС 24 часа.

5. Проба на оксидазу.

6. Фаготипирование серовараTyphi (или серовара Paratyphi B).

7. Проба на чувствительность к антибиотикам.

IV этап

1. Проводят биохимическое типирование сальмонелл, т.е. определяют принадлежность к серологической группе.

2. Проводят серологическую идентификацию культуры, т.е. ставят РА на стекле с поливалентной сальмонеллезной сывороткой АВСДЕ групп, затем с О-сыворотками данной серологической группы и с Н-сыворотками I и II фазы, определяя, таким образом, вид выделенной культуры.

3.Учитывают антибиотикограмму и выдают окончательный ответ.

Серодиагностика тифопаратифозных заболеваний (реакции Видаля и Ви-гемагглютинации). Высокий титр антител в крови больных тифопаратифами регистрируется на 5-7-е сут (при сальмонеллезных гастоэнтеритах - на 2-3-й неделе).

2. Сальмонеллы вызывают у человека следующие заболевания:

- серотип Typhi – брюшной тиф (антропоноз);

- серотип Paratyphi A – паратиф А и сальмонеллез;

- серотип Paratyphi В – паратиф В и сальмонеллез;

- серотип Paratyphi С – паратиф С и сальмонеллез;

- все остальные виды – сальмонеллез (пищевая токсикоинфекция).

3. Материал для исследования: испражнения, кровь, моча, дуоденальное содержимое, рвотные массы и промывные воды желудка, соскоб розеол, пищевые продукты, секционный материал.

4. Элективные и дифференциально-диагностические среды и характер роста:

1. Среда Рапопорта - равномерное помутнение.

10-20% желчный бульон На эти среды засевают кровь

(элективные среды)

2. Селенитовый бульон, - равномерное помутнение.

магниевая среда, бульон На эти среды засевают любой материал,

Мюллера, бульон Кауфмана кроме крови и дуоденального

(среды обогащения) содержимого.

Среды Эндо, Левина, - все виды сальмонелл образуют бесцветные,

Плоскирева блестящие, прозрачные колонии через 24 часа инкубации.

Среда ВСА - через 24 часа все виды сальмонелл образуют

(Вильсон-Блера) зеленые колонии, а через 48 часов – Typhi

и Paratyphi B образуют черные колонии,

Paratyphi A – зеленые колонии.

5. Методы лабораторной диагностики:

1) Бактериологический – основной. 2) Серологический.

3) Микроскопический.

6. Тесты идентификации сальмонелл: