1.3.4.4. Интегрины– рецепторы адгезивных белков

Интегрин IIb/3 (ГП IIb/IIIа) – катионзависимый гетеродимерный комплекс - состоит из двух мембранных гликопротеинов I типа– субединиц IIb и 3.

Семейство интегринов обеспечивает связывание клеток с адгезивными белками сосудистой стенки — фактором фон Виллебранда, коллагеном, фибронектином, ламинином, тромбоспондином и фибриногеном плазмы крови (Таблица 3). Из всех адгезивных белков только (!!!) фактор фон Виллебранда, связывая ГПIb в комплексе ГП Ib/IX/V, обеспечивает начальное прикрепление тромбоцитов к поврежденному субэндотелию в сосудах с высокой скоростью сдвига. Интегрины работают как рецепторные белки и регулируют клеточные функции.

Таблица 3

Адгезивные белки, их рецепторы и лиганды в образовании

тромбоцитарных тромбов

Адгезивные белки и субстраты	Рецепторы	Лиганды адгезивных белков
Фактор фон Виллебранда	ГП Ib IIb3	Фактор VIII коллаген(I-VI типы) фибрин гликозаминогликаны
Коллаген	ГП VI 21	фактор фон Виллебранда фибриноген фибронектин тромбоспондин
Фибриноген/ Фибрин	IIb3 v1 v2 v3	тромбин фактор XIII плазминоген t- PA фибронектин коллаген гепарин
Фибронектин	IIb3 51	коллаген фибрин фактор XIII гепарин актин тромбоспондин

Вслед за адгезией тромбоцитов к поврежденному сосуду с помощью мостика - фактора фон Виллебранда, происходит прямое взаимодействие тромбоцитов с коллагеном субэндотелия сначала через рецептор ГП VI, а затем через интегрин 21, что обеспечивает устойчивую адгезию, активацию и агрегацию клеток ( Рис. 5).

Коллаген взаимодействует с рецептором ГПVI тромбоцита, который фосфорилируется src семейством тирозинкиназ. Передача сигнала внутрь клетки ведет к активации фосфолипазы С (ФЛС), освобождению внутриклеточного посредника – внутриклеточного кальция ( [ Са ²⁺ ]i ), и агониста агрегации - АДФ. В результате активации рецептора ГП VI происходит конформационная перестройка второго рецептора коллагена - интегрина 21 (ГП Ia-IIa) в состояние высокого сродства к коллагену. Эта реакция обеспечивает стабилизацию адгезии, распластывание тромбоцитов, их активацию и последующее экспонирование на поверхность тромбоцита интегрина IIb3 (Рис 5). Интегрин IIb3 связывает фибриноген и через этот мостик рекрутирует еще не адгезированные, но активированные тромбоциты. Фибриноген служит агонистом интегрина IIb/3 и индуцирует активацию клеток по механизму снаружи-внутрь.

Таким образом, на начальной стадии адгезии тромбоцитов к субэндотелию имеет место связывание фон Виллебранда фактора с ГП Ib комплекса ГП Ib/IX/V на тромбоцитах, активация клеток. Коллаген субэндотелия предоставляет не только участок узнавания и прикрепления фон Виллебранда фактора к субэндотелию, но и активно взаимодействует со своими рецепторами на тромбоцитах - ГП VI и интегрином 21, и активирует адгезию и агрегацию клеток. На стадии распластывания происходит взаимодействие домена фон Виллебранда фактора, содержащего пептид RGD, с интегрином IIb3. В последнюю стадию включаются только активированные тромбоциты, так как только после активации клеток происходит экспонирование интегрина IIb3 на мембрану клетки и его связывание с адгезивными белками.

При адгезии тромбоцита через ГП Ib или IIb/3 к VWF, иммобилизованному на коллагене субэндотелия генерируются разные кальциевые сигналы, кооперативно регулирующие поведение тромбоцита. Одиночные кальциевые спайки, возникающие при активации ГПIb, вызывают обратимую активацию тромбоцита, экспонирование на поверхность интегрина IIb/3 и непрочное прикрепление клетки к субстрату. Последующие устойчивые кальциевые осцилляции, возникающие при активации IIb/3 адгезивными белками, обеспечивают прочную адгезию.

Итак, за адгезией клеток следует стадия агрегации активированных тромбоцитов. Склеивание клеток осуществляет фибриноген, рецептором которого на тромбоцитах служит интегрин IIb3. Он образует мостики между клетками. На поверхности каждого активированного тромбоцита может находится от 40000 до 80000 копий рецептора - интегрина IIb3 и поэтому образуются очень большие агрегаты клеток в участке активации тромбоцитов. Но агрегаты не достаточно прочны.

В стабилизацию агрегатов вовлекаются другие адгезивные белки: тромбоспондин и фибронектин (Рис 5).

Тромбоспондин-1 освобождается из гранул тромбоцитов. Подобно фактору фон Виллебранда тромбоспондин является модульным гликопротеидом. Молекула его состоит из трех мономеров. В структуре тромбоспондина идентифицированы домены, отвечающие за связывание фибриногена, коллагена, гепарина, фибронектина и клеток посредством реактивного пептида RGD. Основная функция тромбоспондина в гемостазе - стабилизировать связывание клеток с фибриногеном. Тромбоспондин превращает обратимые комплексы в необратимые. Его рецепторы на тромбоцитах- ГП IV(СD36) и интегрин IIb3 (ГП IIb/IIIа). Тромбоспондин связывается с фибриногеном и с рецептором на тромбоцитах.

Фибронектин – основной компонент соединительнотканного матрикса, имеет мультидоменную структуру. Его домены отвечают за связывание с коллагеном, фибрином, фактором XIII свертывания крови,гепарином, актином, тромбоспондином и другими лигандами (Таблица 3). Фибронектин относится к третьему типу белков, связывающих клетки, поскольку выполняет роль и структурного матрикса и белка, связывающего клетки с матриксом. Синтезируются два варианта фибронектина: в мегакариоцитах, предшественниках тромбоцитов, плазменный фибронектин, лишенный последовательности типа III и свободно циркулирующий в кровотоке; в фибробластах синтезируется фибронектин, содержащий блок типа III, связывающий клетки. Фибронектин легко полимеризуется и образует сеть нерастворимых фибрилл матрикса.

Таким образом, в адгезии и агрегации тромбоцитов участвуют адгезивные белки, имеющие рецепторы-интегрины на клетках и множество лигандов, обеспечивающих связывание клеток с компонентами внеклеточного матрикса стенки сосуда и белками крови. Адгезия тромбоцитов к поврежденному участку сосуда обеспечивается лигандами, взаимодействующими с активированным и экспонированным интегрином IIb/3: самим фон Виллебранда фактором, фибриногеном, а также фибронектином, тромбоспондином и другими лигандами, необходимыми для обеспечения стабильных тромбоцитарных агрегатов.