1.3.4.2. Гп Ib–рецептор фон Виллебранда фактора и тромбина

ГП Ib - интегрин, существует на поверхности интактных тромбоцитов в комплексе с ГП IX и ГПV (ГП Ib/IX/V) (Рис 6 ). ГП Ib состоит из двух субъединиц: -(130 kDa) и -(25 kDa), связанных дисульфидным мостиком, и стабилизирован на поверхности интактных тромбоцитов не ковалентной связью с двумя цепями ГП IX(22 kDa) и одной цепью ГПV(82 kDa) (в отношении 2:2:2:1) . Все компоненты комплекса относятся к типу I гликопротеинов, связанных с мембраной, имеют в структуре повторы участков, богатых лейцином, и N- и С-концевые петлевидные фланкирующие последовательности.

ГП Ib - основная субъединица комплекса ГП Ib/IX/V, связывающая лиганды. ГП Ib содержит в N-концевой последовательности (1-282ао) перекрывающиеся, но разные участки связывания VWF, Р-селектина, лейкоцитарного интегрина Мас-1(М/2, CD11b/CD18), высокомолекулярного кининогена, а также протеиназ - тромбина и фактора XIa контактной фазы свертывания крови.

Тромбин, связываясь с ГП Ib двумя участками своего центра узнавания, может служить мостиком между ГП Ib одного и того же тромбоцита или близлежащих клеток.

1.3.4.3.Активация тромбоцитов фактором фон Виллебранда

Фактор фон Виллебранда, взаимодействуя с рецептором — ГП Ib (комплекса ГП Ib/IX/V), активирует клетки, стимулирует следующие реакции:

1) экспонирование на мембране интегрина IIb/3,

2) распластывание тромбоцита,

3) секрецию агонистов агрегации –АДФ и тромбоксана А₂ (ТХА₂) (Рис 6).

Механизм передачи сигнала через ГП Ib внутрь клетки осуществляется двумя путями.

1 - через прямое взаимодействие цитоплазматического домена ГП Ib с белками цитоскелета (участвующими в передаче сигнала, такими как филамин и адапторный белок 14-3-3 ). Эти белки связаны с кальмодулином, а также ассоциированы с Src киназами и PI3-киназами. Фосфорилирование этих белков цитоскелета происходит, в частности в результате связывания фон Виллебранда фактора с ГП Ib, что вызывает повышение концентрации внутриклеточного кальция ( [Ca ²⁺]_i ), изменение формы тромбоцита, его распластывание, активацию и экспонирование на поверхности клетки второго рецептора VWF -интегрина IIb/3 (ГП IIb/IIIа по устаревшей номенклатуре).

2 - через ассоциацию комплекса ГП Ib/IX/V с двумя ITAM (immunoreceptor tyrosine-based activatory motifs) - содержащими белками (FcRIIa и FcR). В результате это взаимодействие ведет к фосфорилированию ITAM тирозина семейством syk киназ, активации фосфолипазы С (PLC), протеинкиназы C (PKC) и повышению концентрации внутриклеточного кальция.

Оба пути передачи сигнала через рецептор ГП Ib ведут к активации тромбоцита, освобождению агонистов агрегации тромбоцитов – АДФ, тромбоксана А₂ (ТХА₂), и экспонированию на поверхности клетки интегрина IIb/3 - рецептора фибриногена и VWF. Связывание интегрина IIb/3 с лигандами индуцирует активацию тромбоцита по механизму снаружи-внутрь (outside-in).

Итак, интегрин IIb/3 служит рецептором как фактора фон Виллебранда, так и фибриногена (Рис 5, 6).

Большая часть интегринов IIb/3 на активированных тромбоцитах оккупируется фибриногеном, поскольку в плазме человека концентрация фибриногена на несколько порядков выше (около 9M), чем фактора фон Виллебранда (около 1nM). При недостаточности фибриногена или его отсутствии у пациентов с афибриногенемией фактор фон Виллебранда может поддерживать агрегацию тромбоцитов. Фактор фон Виллебранда отвечает за формирование достаточно стабильных агрегатов тромбоцитов в поврежденных сосудах с высоким напряжением сдвига и скоростью сдвига, как например в артериолах, тогда как один фибриноген не способен обеспечить в них агрегацию. О конкуренции фактора фон Виллебранда и фибриногена за связывание с экспонированным интегрином IIb/3 свидетельствует тот факт, что начальная скорость агрегации тромбоцитов выше в отсутствии фибриногена.