Методика стерильной работы
Во время культивирования бактерий чрезвычайно важно не допустить контаминации (заражения) культур. Бактерии и споры грибов находятся везде, в том числе на руках и на рабочих столах. Кольца микробиологических петель и внутренние поверхности чашек нельзя трогать руками или класть на стол. Протирайте столы 70% спиртом или 10% раствором хлорки (рекомендуется надеть перчатки).
Lactobacillus bulgaricus
(бактерии в форме палочек, или бациллы)
Streptococcus thermophilus
(сферические бактерии, или кокки)
Подготовка к лабораторной работе
Этот набор рассчитан на 8 групп учеников, по 4 ученика в каждой
Подготовка к Уроку 1
За 3-7 дней до начала лабораторной работы
Приготовьте чашки с LBS-агаром, как объяснено ниже.
Налейте 500 мл дистиллированной воды в колбу объемом не менее 1 л.
Высыпьте все содержимое упаковки LB -агара в воду. Добавьте 5 г сахара (сахарозы). Вращательными движениями перемешайте содержимое колбы (агар не растворится, это нормально). Доведите раствор до кипения в микроволновке. Выньте колбу и осторожно помешайте.
Повторите процесс кипячения и помешивания не менее трёх раз до полного растворения агара. (раствор должен быть абсолютно прозрачным и гомогенным, без плавающих в нем частиц агара). Будьте осторожны, кипящий агар легко может выплеснуться из колбы.
К
огда
агар растворится, поставьте колбу на
стол, чтобы она остыла до такой
температуры, при которой вы сможете не
обжигаясь держать ее в руке (≈50°С).
Будьте внимательны, если агар остынет
слишком сильно, он начнет застывать.
Заливка чашек
Составьте стопку из 4-8 чашек Петри. На дне нижней чашки напишите “LBS” и дату. Начиная с нижней чашки, приподнимайте всю верхнюю часть стопки одной рукой, и наливайте агар другой.
Наполняйте чашки от 1/3 до половины (≈10 мл) агаром и переходите к следующей чашке. Агара должно хватить на 30-40 чашек.
П
осле
того как чашки два дня подсохнут при
комнатной температуре, их можно
использовать. Если необходимо хранить
чашки дольше, их надо сложить в пластиковый
пакет, в котором они были, чтобы
предотвратить дальнейшее высыхание.
Пакет нужно плотно запечатать клейкой
лентой, перевернуть, чтобы на поверхность
агара не капал конденсат, и хранить в
холодильнике.
За 24 часа или менее до начала работы
Приготовьте стерильную воду
Налейте около 100 мл воды в неплотно закрытую стеклянную бутылку. Нагрейте до кипения в микроволновке или на плитке. Кипятите 10 минут на маленькой мощности. Закройте бутылку и дайте ей остыть.
Растворите сухой штамм E. coli HB101 K-12.
Приготовьте образцы молока и йогурта.
А. Купите свежее молоко и несколько разных молочных йогуртов, помеченных как содержащие живые активные культуры. Йогурты должны быть самыми свежими. Храните их в холодильнике.
Б. Напишите на 8 пробирках «молоко» и налейте примерно по 5 мл молока в каждую пробирку. Храните в холодильнике
В. По желанию, вы можете также разлить йогурт по пробиркам или маленьким стаканчикам и распределить между группами учеников. Ученики могут также брать йогурт прямо из упаковки. Храните йогурт в холодильнике.