2. Реакция преципитации

Для постановки реакции преципитации исп-т высокодисперсный АГ в виде прозрач. р-ра. При соед-ии АГ с АТ в присут электролита происх-т взаимод-е с образов-м видимых агрегатов (помутнение, хлопья) частиц, осаждающ-ся на дно пробирки. Осадок получил название преципитат. В 2 фазы. 1-я фаза – соед-е АГ с АТ. 2-я – коагуляция (преципитация) специф-го комплекса АГ-АТ в р-ре электролита с образ-м видимых частиц (серо-белые хлопья.)

Реакция диффузионной преципитации в геле (РДП). Эта реакция считается наиболее чувствительной и эффективной при иммунологических исследованиях. В отличие от жидкой среды, где образуется одна линия (полоска) преципитации, в условиях геля реагенты (антигены и антитела) диффундируют навстречу друг другу и на границе соприкосновения (встречи) образуются белые линии преципитата. Существует несколько методов постановки РП.

Метод прямой одномерной диффузии РДП заключается в том, что на столбик или пластинку агара, содержащего специфическую преципитирующую сыворотку, наслаивают антиген в физрастворе, который медленно диффундирует в агар. В результате взаимодействия образуются полоски преципитата, соответствующие реагирующим антигену — антителу.

Метод двойной (встречной) двухмерной диффузии, предложенный Оухтерлони. Реакцию ставят в чашках Петри или на предметных стеклах, залитых 1 %-ным нейтральным агаром. В застывшем агаре с помощью пробойника вырезают по трафаретке луночки размером 0.6 мм. Обычно в центр лунку вносят специф сыворотку, в окружаю лунки испытуемые (экстракты) и контрольные антигены. Оба компонента диффундируют во встречном направлении в слое агарового геля. На месте встречи специфических антигена и антитела образуется преципитат серо-белого цвета в виде полосок, линий. При исслед набора АТ в исследуемых сыворотках в центральную лунку вносят известный антиген, а в окружающие — соответствующие сыворотки.

В 1953 г. Окли и Фултроп предложили сравнительно простой метод постановки РДП, заключающийся в том, что каждый реагент (антиген и антитело) смешивают с агаром отдельно и поочередно вносят в пробирку. На границе слоев в пробирке при положительном результате образуется полоска преципитата. Радиальная иммунодиффузня (РИД). На поверхность стекла или пластика наливают расплавленный агар, предварительно смешанный с высокоактивной антисывороткой. В застывшем агаре делают лунку (обычно до 2 мм в диаметре) и заполняют ее точным количеством испытуемого антигена. Опыт проводят во влажной камере при постоянной температуре. Антиген диффундирует из лунок радиально в агаровый гель, смешанный с антителами, в результате образуются кольца преципитации. Диаметр этих колец прямо пропорционален концентрации антигена. РИД в клинике используют для определения содержания растворимых антигенов, иммуноглобулинов всех классов, а также различных токсинов и ферментов.

3. CD4 Т-клетки покинувшие тимус, не могут непосредственно встать на путь созревания до зрелых эффекторов. В отличие от наив­ных CD 8 Т-клеток, они должны пройти дополнительный этап развития на периферии, который заканчивается формированием незрелых Т_н0-клеток. Именно от этих коммитированных клеток в зависимости от ситуации формируются зрелые эффекторы: 1_Н1-клетки воспаления и хелперные Т_н2-клетки. Они не различаются по фенотипическим маркерам клеточной поверхности, но известны их разные возможности в синтезе цитокинов. Т_н0 продуцируют интерлейкин-2,интерлейкин-4;Т_н1 (CD4 Т-клетки воспаления) -интерлейкин-2, интерлейкин-3, гранулоцитарно-макрофагальныи колониестимулирующий фактор (ГМ-КСМ), интерферон-у, Фак­тор некроза опухолей-р (лимфотоксин); Т_н2 (хелперные CD4 Т-клетки) - интерлейкины-3,4,5,6,10 и ГМ-КСМ. Интерлеикин-3 и ГМ-КСМ являются общими для Т_н1 и Т_н2. Эти два цитокина принимают участие в гемопоэтической дифференцировке в кост­ном мозге. Остальные цитокины характерны только для опреде­ленной субпопуляции. Цитокины, свойственные Т_н1, активиру­ют в основном макрофаги, цитокины Т_н2 - В-клетки. Активность именно этих цитокинов определяет разную эффекторную функ­цию двух субпопуляций.

Механизмы, направляющие дифференцировку 1-клеток в за­висимости от иммунологической ситуации, пока недостаточно по­нятны однако ряд экспериментальных данных позволяет пред­ставить следующую картину. Макрофаги, захватившие бактерии или вирусы, начинают продукцию интерлейкина-12, для которо­го клеткой-мишенью являются наивные Т-клетки. При этом сти­мулированные макрофагами нормальные киллеры секретируют интерферон-у. Два этих цитокина при совместном действии на наивные Т-клетки определяют их развитие в сторону образования CD4 Т-клеток воспаления. В то же время наивные Т-клетки, сти­мулированные интерлейкином-4, дифференцируются в хелперные CD4 Т-клетки. Источником интерлейкина-4 могут быть базофилы и тучные клетки. При этом интерлейкин-4 является ингиби­тором развития Т-клеток воспаления.

Билет №6.