Билет 1.Иммунология, задачи. цель. ГЗТ. Реакц. Агглютинации (РА)

1. Им-я охватывает все разделы биологии. Им-логия – наука об иммунитете;о строении и закономерностях функционирования иммунной системы, ее заболеваниях и способах иммунной терапии.в иммунологии является познание механизмов формирования специфического иммунного ответа организма ко всем чужеродным и антигенном отношении соединиениям. 

Им-я изучает:- строение иммунной системы организма- закономерности и механизмы развития иммунных реакций

- механизмы контроля и регуляции им. реакций- болезни иммунной системы и ее дисфункции

- условия и закономерности развития иммунопатологических реакций и способы их коррекции

- возможности использования резервов и механизмов иммунной системы в борьбе с инфекционными и неинфекционными заболеваниями человека и животных, и их разработка

- иммунологические проблемы трансплантации органов и тканей, и их коррекция.

В иммунологии применяется целый ряд экспериментальных методов- методический аппарат анатомии, физиологии, гистологии и цитологии высших животных, биохимические методы очистки и опре­деления различных свойств органических молекул молекулярной биологии и генетической инженерии, включая клонирование и экспрессирование отдельных генов, секвениро-вание белков и нуклеиновых кислот, направленное получение мутаций путем замены генов и получение клеточных линий с конкретными гене­тическими нарушениями.

 Среди основных-Иммунофлуоресцентные методы для обнаружения аутоантител и антител к тканевым и клеточным антигенам.Иммунологический анализ антигенов и антител с помощью меченых реагентов.Иммуно-ферм. Анализ.,реак. Связ. Компл. Реакция торможения гемагглютинации. Реакции, основанные на феномене преципитации Им-я очень тесны связ. с генетикой (иммуногенетика), молекулярной биологией (молек. им-я), морфологией (иммуноморфология), биохимией и др. (трансплантационная им-я, им-я рака).

2. Одной из форм клеточного иммунного ответа является реак­ция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). В отличие от реакций I, II и III типов реакции IV типа не свя­заны с антителами, а обусловлены клеточными реакциями, прежде всего Т-лимфоцитами. Реакции замедленного типа могут возникать при сенсибилизации организма: 1. Микроорганизмами и микробными антигенами (бактериальны­ми, грибковыми, протозойными, вирусными); 2. Гельминтами; 3. Природными и искусственно синтезированными гаптенами (лекарственные препараты, красители); 4. Некоторыми белками.

Реакция впер­вые описана бактериологом Робертом Кохом . Введение интактным морским свинкам вирулентных ба­цилл туберкулеза приводит к быстро­му распространению возбудителя по организму, развитию остро­го инфекционного процесса, как правило с летальным исходом. Картина меняется, если бациллы вводятся предварительно имму­низированным животным. В этом случае внутрикожно введенный возбудитель оказывается локализованным в месте инъекции в ре­зультате развития воспалительной реакции. Клетки воспалитель­ного узелка представлены в основном макрофагами и лимфоци­тами

При повторном введении антигена реакция ГЗТ проявляется не сразу, а через 24 — 48 ч, отсюда и ее название — гиперчувстви­тельность замедленного типа. По величине образующегося узелко­вого уплотнения (гранулемы) в месте введения антигена судят о напряженности иммунной реакции.

Первичное введение антигена в интактный организм приводит к его захвату макрофагами, внутриклеточной деградации части антигена и экспрессии образующихся антигенных фрагментов (пеп­тидов) на клеточной поверхности в комплексе с молекулами II класса МНС. Комплекс пептид: молекула II класса рас­познается наивными CD4 Т-клетками (Тн0), которые дифферен­цируются в CD4 Т-клетки воспаления (Тн1) и хелперные CD4 Т-клетки (Тн2). При повторном введении того же самого антигена. дифференцированные клетки Тн1 и Тн2 быстро вступают в реак­цию взаимодействия с макрофагом, поглотившим антиген. Резуль­татом специфического взаимодействия является секреция клетка­ми Тн1 хемоаттрактантов, привлекающих в зону проникновения антигена макрофаги из кровотока. Биологическая роль ГЗТ выражается прежде всего в защите от устойчивых инфекций и микробов, способных размножаться внутри фаголизосом макрофагов. 

3. Реакция агглютинации (ра)В реакции агглютинации (РА) участвуют антитела (агглютинины), содержащиеся в сыворотке крови больного организма, антиген (агглютиноген) — клетки живых или убитых бактерий, возбудителей данной болезни, а неспецифическая фаза осуществляется в присутствии электролита (0,85 %-ного раствора хлор ид а-натрия).

Сущность реакции заключается во взаимодействии антитела с антигеном, в результате чего происходит склеивание микробов с образованием хлопьев, комочков, видимых невооруженных глазом. РА характеризуется высокой специфичностью и используется с двоякой целью:

а)для диагностики инфекционной болезни путем обнаружения в сыворотке крови б)определения вида (типа) выделенного микроба при помощи заведомо известных агглютинирующих сывороток, содержащих видо- и типоспецифические антитела (агглютинины).

В последние годы широко применяют реакцию непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА). По своей высокой чувствительности и специфичности РНГА заняла одно из ведущих мест в серодиагностике. Сущность ее заключается в том, что белковые молекулы антигена соответствующего возбудителя предварительно адсорбируют на обработанных танином эритроцитах барана. Затем ставят реакцию путем смешения сенсибилизированных эритроцитов с сывороткой крови больных животных. При наличии в сыворотке специфических антител на данный антиген происходит агглютинация эритроцитов — реакция положительна. РНГА ставят при диагностике микоплазмоза, сальмонеллезов, вирусных инфекций. Реакция агглютинации применяется в лабораторной практике для идентификации выделенных микроорганизмов или для обнаружения специфических антител в сыворотке крови. Механизм реакции основан на взаимодействии детерминантных групп антигена с активными центрами иммуноглобулина в электролитной среде. Реакции протекают в две фазы - соединение антигена с антителом, вторая фаза - выделение в осадок образовавшегося комплекса АГ+АТ .

Билет №5

1. Неспецифический иммунитет. Общая характеристика факторов неспецифической защиты (микро-макрофаги, эузинофилы, натуральные киллеры). Их значение и функции.

2. Аллергия. Определение понятия. Классификация аллергических реакций (по Кумбусу и Джеллу). Механизмы развития аллергии. Краткая характеристика основных видов аллергических реакций.

3. Общая характеристика методов «Определения фагоцитарной активности полиморфоядерных лейкоцитов, показания к применению, оценка результатов.

1. Врожденный им-т – невосприимчивость к инфекционным агентам, которая детерминирована геномом.

Она структурно проявляется количеством и порядком ганглиозидов определенного типа на поверхности мембраны клеток. Свойственен живым организмам определенного вида к определенному возбудителю инфекции. Передается из поколения в поколение. Например, человек не может заболеть чумой собак. Лошадь не может болеть ящуром. Собаки не могут заболеть сифилисом. В основе механизмов врожденного им-та к определенным возбудителям лежит отсутствие в клетках организма рецепторов, субстратов, необходимых для адгезии и размножения возбудителя болезни, а также наличие веществ, блокирующих размножение микробов определенной группы. Врожденный им-т весьма прочный, но не абсолютный. Пастер показал в свое время очень интересный факт – в естественных условиях куры не болеют сибирской язвой. Но он смог заразить курицу после искусственного понижения температуры тела погружением конечностей в холодную воду. Мечникову удалось вызвать экспериментальный столбняк у лягушки, путем согревания ее в термостате. Врожденной резистентностью в основном обладают взрослые животные. У новорожденных видовая устойчивость во многих случаях отсутствует. (Крольчата чувствительны к заражению ящером, в то время, как взрослые им не болеют). Следует учитывать, что животные, не обладающие инфекционной болезнью, могут быть носителями возбудителей болезни.

Клеточные факторы неспецифического иммунитета: микро- и макрофаги, эозинофилы, натуральные киллеры Их функции. Все фагоцитарные клетки делят на микро- и макрофаги. Микрофаги – зрелые нейтрафильные гранулоциты, это подвижные клетки, обладающие амебоидной подвижностью. Макрофаги – клетки моноцитарного происхождения, подвижные, они переходят в ткани, оседают там и становятся тканевыми макрофагами. Есть оседлые макрофаги в эндотелии многих клеток, входящих в ретикуло-эндотелиальную систему. Способны к ограниченному перевариванию поглощенного материала и в конце погибают, образуя гнойную массу. Макрофаги способны переваривать вне- и внутриклеточных паразитов. Это долгоживущие клетки. Они – главные мусорщики. В селезенке поглощают стареющие клетки крови, выделяющие в-ва, способные регенерир-и этих тканей. Макрофаги способны частично перевар-ть антиген на пептиды и экспонир-ть переработанные пептиды, пептиды на своей поверхности совместно с собственными молекулами гистосовместимости 1 или 2кл. Такие комплексы пептид мол. гистосовм. распозн-ся Т-лимф. Целостные антигены не распознают Т-лимф. Активированные макро- и микрофаги вырабатывают в-ва, которые поступают в фагосомы и эти в-ва участвуют в переваривании поглощенного материала. Такие же в-ва способны секретировать во внешнюю среду, осуществляющую бактерицидную функцию. Макрофаги. Образуются из промоноцитов костного мозга. Присутствуют повсюду – в соединительных тканях, вокруг базальных мембран мелких кровеносных сосудов, особенно высоко их содержание в легких (альвеолярные макрофаги) и печени (клетки Купфера). Макрофаги выстилают синусоиды селезенки и медуллярные синусы лимфоузлов. Еще один пример макрофагов – мезангиальные клетки почечных клубочков, микроглиальные клетки мозга и остеокласты костной ткани. Функция макрофагов в основном сводиться к борьбе с бактериями (гноеродными) вирусами и простейшими, которые способны существовать внутри клеток хозяина. Все эти клетки участвуют в формировании фагоцитарных реакций, в реакциях гуморального им-та. Важная функция – презентация антигенов. Нейро- базо- и эозинофилы. Эти клетки играют важную роль в фагоцитозе, участвуют в реакциях аллергии. NK-клетки - Натуральные киллерные клетки. У них отсутствуют структуры, способные к специфическому распознаванию антигена, подобно тем, которыми обладают Т- и В-клетки. Они как и Т-киллеры разрушают определенную категорию чужеродных клеток, но в отличие от последних неспецифическим образом. Они составляют в организме около 15% от всех лимфоцитов. Уникальным их свойством является способность быть инертными к собственным (аутологичным) клеточным антигенам гистосовместимости при сохранении агрессивности по отношению к клеткам, несущим гоиологичные аллоантигены. В иммунологии это явление называют «метка своего». Гистогенезих связан с развитием клональной лимфоцитов вообще и Т-клеток в частности.

2. Аллергия есть реакция повышенной чувствительности немедленного типа в ответ на ряд веществ внешней среды с антигенными свойствами. В связи с характером индуцируемой этими антигенами реакции их называют аллергенами. Классификация аллергических реакций по Джеллу и Кумбсу, 1968 г. предусматривает четыре типа аллергических реакций:

I тип — анафилактический (медиаторный) тип реакций гиперчувствительности;

II тип — цитотоксический тип реакций гиперчувствительности;

III тип — иммунокомплексный тип реакций гиперчувствительности;

IV тип — реакции гиперчувствительности замедленного типа (туберкулиновая или клеточно-опосредованная гиперчувствительность);

При реакции I типа сенсибилизация тканей связана с фиксацией комплексов антител-реагинов и антигенов на поверхности тучных клеток и выбросом ими биологически активных веществ (гистамин, серотонин) или синтезом последних другими клетками [Гущин И. С, 1979]. Реагирование этого типа лежит в основе атонии. Этот тип возникает на экзогенные т-зависимые а/г (антибиотики), пищевые, пыльца и др. Проявляется как анофилотоксия (лек. препараты) и атопия (наследст. предрасп.). Аллергическая реакция II типа обусловлена синтезом в организме цитотоксических антител (IgM и IgG) к антигенам клеток различных тканей и органов.  Развивается на простые хим. вещ-ва, компоненты мембран. При аллергической реакции III типа циркулирующие антитела-преципитины, относящиеся как к IgM-, так и IgG-классу, образуют с антигеном иммунные комплексы, на которых фиксируется комплемент. Такие иммунные комплексы чаще вызывают ауто-аллергические болезни. Развив. на большие дозы антигена при недостатке фагоцитарной активности. Аллергическая реакция IV, замедленного, типа, характеризуется развитием гиперчувствительности, при которой сенсибилизированные лимфоциты реагируют со специфическим антигеном в основном в присутствии макрофагов. При этом из лимфоцитов освобождается большое количество лимфокинов, приводящих ко вторичным изменениям. Реакции такого типа часто бывают при многих инфекционных и грибковых болезнях, лежат в основе инфекционно-аллергической бронхиальной астмы, в формировании которой основную роль играют Т-лимфоциты (р-я отторжения трансплантанта).

3. Фагоцитарная активность лейкоцитов — способность фагоцитов захватывать, умерщвлять и переваривать патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Для оценки фагоцитарной активности используют ряд показателей: а) фагоцитарный показатель — ФП (процент лейкоцитов, фагоцитирующих тест-микробы или тест-частицы); б) фагоцитарное число — ФЧ (отношение числа фагоцитированных частиц к числу активных фагоцитов); в) показатель завершенности фагоцитоза — ПЗФ (процентное отношение ФЧ через 15′, ФЧ через 120′ к ФЧ через 15′; г) опсонофагоцитарный показатель — ОФП (отношение ФЧ с добавлением иммунной сыворотки к ФЧ с добавлением нормальной сыворотки). В фагоцитарной реакции используют и живые, и убитые микроорганизмы (E.coli, S.aureus, С. albicans), а также инертные частицы (уголь, латекс). Для определения указанных показателей лейкоциты смешивают в пробирке с микроорганизмами или инертными частицами, инкубируют в термостате при 37°С в течение 15-20 минут. Затем из данной смеси на предметных стеклах готовят микропрепараты, фиксируют их метанолом, окрашивают методом Романовского—Гимзы и с помощью микроскопа подсчитывают число активных (фагоцитирующих) лейкоцитов, приходящихся на 200 клеток, а также число фагоцитированных одним фагоцитом частиц. Функциональную активность фагоцитов можно оценить и косвенными методами — хемилюминесценцией, по активности лизосомальных ферментов, содержанию катионных белков, продукции цитокинов, по экспрессии рецепторов метаболической активности, адгезивности. В препаратах подсчитывают удельное и абсолютное содержание фагоцитирующих клеток (возможен вариант для специальных исследований: подсчет для моноцитов и нейтрофилов отдельно) - фагоцитарный показатель (ФП), среднее количество частиц латекса, поглощеных фагоцитировавшей клеткой, - фагоци¬тарное число (ФЧ). Рассчитывается интегральный фагоцитарный индекс по формуле: ИФИ= ФПхФЧ/100, где ИФИ - интегральный фагоцитарный индекс; ФП - фагоцитарный показатель, %; ФЧ - фагоцитарное число.

Билет 3

1. Система иммунитета у млекопитающих, (Определение понятия иммунитет. Виды иммунитета и их характеристика)

Им-т – с лат. Imirtunitas – освобождение или избавление от чего-либо. Им-т – это состояние невосприимчивости организма к воздействию болезнетворных микробов, продуктов их жизнедеятельности (токсинов), а также других чужеродных веществ биологической природы.Организм человека достаточно четко дифференцирует «свое» и «чужое». Благодаря этому обеспечивается защита организма не только от внедрения болезнетворных микробов, но и чужеродных белков либо полисахаридов и любых других чужеродных веществ.

Т.о. распознавание «своего» и «чужого» для организма является жизненно важной функцией. И защита от поступления из внешней среды веществ с чужеродной информацией грозит нарушению структурного и химического состава самого организма.

Им-т является одним из проявлений гомеостаза. След-но им-т является функцией всего живого. Др. словами, все биологические объекты обладают им-том.

Им-т – «память будущего».По происхождению выделяют 2 вида им-та: врожденный (генетический, наследственный) и приобретенный

Приобретенный делят на – естественный и искусственный.

Приобретенный естественный – активный (постинфекционный) и пассивный (транспланцентарный) передается от матери плоду.Приобретенный иск-ный – также активный и пассивный.

Врожд. им-т – невосприимчивость к инфекционным агентам, которая детерминирована геномом. Она структурно проявляется количеством и порядком ганглиозидов определенного типа на поверхности мембраны клеток.

Свойственен ж. о. определенного вида к определенному возбудителю инфекции.Передается из поколения в поколение.Например, человек не может заболеть чумой собак. Лошадь не может болеть ящуром. Собаки не могут заболеть сифилисом.

В основе механизмов врожденного им-та к определенным возбудителям лежит отсутствие в клетках организма рецепторов, субстратов, необходимых для адгезии и размножения возбудителя болезни, а также наличие веществ, блокирующих размножение микробов определенной группы.

Врожденный им-т весьма прочный, но не абсолютный.

Пастер показал в свое время очень интересный факт – в естественных условиях куры не болеют сибирской язвой. Но он смог заразить курицу после искусственного понижения температуры тела погружением конечностей в холодную воду. Мечникову удалось вызвать экспериментальный столбняк у лягушки, путем согревания ее в термостате.

Врожденной резистентностью в основном обладают взрослые животные. У новорожденных видовая устойчивость во многих случаях отсутствует. (Крольчата чувствительны к заражению ящуром, в то время, как взрослые им не болеют). Следует учитывать, что животные, не обладающие инфекционной болезнью, могут быть носителями возбудителей болезни.

Приобретенный им-т.Особенностью является его специифичность, т.е. уст-ть организма к определенному возбудителю организму.

Активный им-т образуется после естественного перенесения болезни человеком или животным. С возрастом создается к определенному возбудителю (иммунизирующие субинфекции). Человеку необходимо переболеть детскими инфекциями (ветряная оспа, корь).

Приобретенный им-т не обязательно должен быть связан с клиническими проявлениями заболевания. Может происходить скрытая иммунизация.

Пассивный им-т – характерен для новорожденных.

Приобретается или за счет трансплантации или за счет транспоанцентарного поступления антител от матери плоду (у птиц материнские антитела прередаются плоду с лецитиновой фракцией желтка – трансавериальный путь). Различают естественно и искусственно вызванный колостральный им-т. ЕКИ – вызывается антителами, которые были естественно выработаны в организме под воздействием антигенов окружающей среды.

ИКИ – вызывается в результате искусственной иммунизации организма матери определенными антителами. Материнское молозево обладает бактериостатическими свойствами.

Естественный приобретенный активный им-т может сохраняться 1-2 года. Иногда может быть и пожизненно. Естественный приобретенный пассивный им-т обеспечивает состояние невосприимчивости от нескольких недель до нескольких месяцев.Искусственный приобретенный активный им-т возникает в рез-те иммунизации организма вакцинами через 7-14 дней после вакцинации и сохраняется до нескольких месяцев или лет. Искусственный приобретенный пассивный им-т создается при введении им-кой сыворотки в организм, содержащие антитела.Пассивный им-т как правило не стоек, не более 15 дней.Им-т, кроме того, делят на:- антибактериальный. противовирусный, антиотоксический, антипротозойный, антигельментный. По локализации:- местный (локальный).Если после перенесения болезни организм освободился от возбудителя им-т называется стерильным.В зависимости от механизмов защиты:- гуморальный - Обуславливается выработкой антител в зараженном организме, связан с образованием специфических клеток, реагирующих с Т-лимфоцитами. ­ клеточный.