Определение серологических вариантов иерсиний.

После того как вопрос о принадлежности изучаемой культуры к виду иерсиний решен положительно, необходимо определить серологический вариант.

Мировая и отечественная практика располагает ограниченным набором моновалентных сывороток, преимущественно для идентификации патогенных сероваров. Отечественная промышленность (НИИЭМ им.Пастера) выпускает наборы диагностических сывороток к Y.pseudotuberculosis: моновалентные распространенных серотипов 1 и 3, поливалентную к серотипам 1—5. К Y.enterocolitica — О:3; О:4,32; О:4,33; О:5; О:5,27; О:6,30; О:7,8; О:8; О:9; О:13,7. Серологической идентификации подлежат культуры, отнесенные по биохимическим свойствам к видам Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica с помощью реакции агглютинации на стекле по общепринятой методике.

Формулировка ответов, сроки выдачи.

 Отрицательный ответ при бактериологическом исследовании выдают в следующие сроки: при отсутствии на плотных средах подозрительных колоний при высеве на 7 сутки, ответ выдают на 9 сутки с заключением: "Возбудители иерсиниоза и псевдотуберкулеза не обнаружены".

 Положительные результаты могут быть получены в зависимости от, того, на каком из этапов высева со среды обогащения получены подозрительные колонии. При первом высеве — на 6-7 сутки; при втором высеве — на 9 сутки; при третьем высеве — на 11 сутки.

В положительном ответе следует указать: выделена Y.enterocolitica… серовара или выращена Y.pseudotuberculosis … серовара.

Основными недостатками бактериологического метода исследования являются низкая частота получения роста культуры, неинформативность (Y.enterocolitica выделяют в 2-3% проб) и ретроспективность.

II Иммунологические методы диагностики

Из многообразия иммунологических методов, разрабатываемых и используемых для эффективной и ранней диагностики на протяжении последнего десятилетия, серьезного внимания заслуживает иммуноферментный анализ (ИФА) с различными вариантами тест-систем.

В НИИЭМ им. Пастера была разработана технология ИФА тест-системы на основе липополисахарида псевдотуберкулезных бактерий (ИФА-ЛПС). Специфические антигены Y.pseudotuberculosis обнаруживаются на 2-е и 3-й сутки от начала заболевания. На 5—6-е сутки число положительных результатов возрастает, достигая максимума, а затем постепенно снижается. Всего на 1-й неделе заболевания псевдотуберкулез удается диагностировать с помощью ИФА более чем у 68 % больных. В эти сроки бактериологические находки единичны.

Информативность различных видов исследуемого материала существенно отличается. Возбудителя псевдотуберкулеза и его антиген чаще (в 90 % случаев) обнаруживают при абдоминальной форме болезни, несколько реже (85 %) при артралгической. Смешанная форма подтверждена этим методом в 70 % случаев. Наибольшие диагностические трудности представляет скарлатиноподобная форма — 60% находок. При любой из клинических форм максимальное число находок регистрируют при исследовании фекалий.

В настоящее время разработаны лабораторные технологии еще в двух (кроме ИФА-ЛПС) вариантах тест-систем для ИФА.

Полученная тест-система на основе белков наружной мембраны (ИФА-БНМ-I) выявляет антигены Y.pseudotuberculosis серотипов 1—5 в бактериальных культурах и биологических субстратах и не вступает в реакцию с представителями вида Y.enterocolitica и другими бактериями семейства Enterobacteriaceae.

Тест-система обладает специфичностью при исследовании материала от больных, а также органов и тканей животных. Она наиболее эффективна при исследовании материала в начальном периоде болезни, когда антигены обнаруживают в 69—84 % проб копрофильтратов и в 21—38 % проб мочи. На пике развития патологического процесса антигены также часто обнаруживаются в копрофильтратах и моче. Тест-система ИФА-БНМ-I является наиболее оптимальной для диагностики псевдотуберкулеза, вызываемого инвазивным возбудителем.

Наибольшие трудности представляет создание специфической тест-системы для диагностики кишечного иерсиниоза. В НИИЭМ им. Пастера получен лабораторный вариант тест-системы для выявления вирулентных иерсиний (ИФА-БНМ-II). Ее испытание показало, что препарат выявляет патогенные иерсиний (антигены) в материале от больных (копрофильтраты, моча), а также в материалах животного происхождения (органы, ткани, экскременты).

Учитывая общность антигенов вирулентности Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica, для определения видовой принадлежности выявленных с помощью ИФА-БНМ-II иерсиний (антигенов) в положительно реагирующих пробах исследование материала (при необходимости) повторяют с применением тест-системы для выявления возбудителя (антигена) псевдотуберкулеза — ИФА-ЛПС.

В последние годы возрастает актуальность применения с диагностическими целями реакции коагглютинации (РКА). Это обусловлено экспрессностью метода и отличием его от других иммунологических методов и реакций, способностью выявлять растворимые термостабильные антигены в секретах человека и в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК). Преимущество РКА перед другими иммунологическими методами состоит в том, что с ее помощью можно определять связанные в иммунных комплексах антигены в период разгара болезни когда другие диагностические реакции для определения антигенов и антител отрицательны. Эта реакция одинаково эффективна при расшифровке острых, рецидивирующих и хронических инфекционных процессов, обусловленных Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica вирулентных серо- и биотипов.

РКА наиболее эффективна в начальном периоде (1—5-й день) острого заболевания, а при других формах — в сроки максимальной выраженности клинических симптомов. Применение РКА для определения псевдотуберкулезных и иерсиниозных антигенов позволяет расширить диагностические возможности в клинической практике. Однако реакцию чаще используют в научных целях, а также при экспертизе пищевых продуктов на инфицирование энтеротоксинами иерсиний.

Отечественная диагностическая практика располагает коммерческим латексным диагностикумом для выявления антигенов возбудителя псевдотуберкулеза в реакции агглютинации латекса (РАЛ).