Виды диагностических препаратов. Принцип изготовления и контроль аллергенов

Взаимодействие молекулы антигена с антителом или его активным Fab-фрагментом сопровождается изменением пространственной структуры антигена.

В образовании комплекса между антителом и антигеном различают две фазы реакции — специфическую и неспецифическую. В первой (специфической) фазе происходит соединение детерминантной группы антигена или гаптена с активным центром антитела. Агрегаты, состоящие из антител и антигенов, утрачивают растворимость в изотонических растворах и выпадают в осадок (вторая, неспецифическая, фаза).

Антитела обладают двумя (IgG) и более (Ig M) активными центрами, которые по своему строению (конфигурации) комплементарны детерминантным группам антигена (рис. 51).

Если в реакции антитела с антигеном участвуют низкодисперсные антигены (бактерии, клетки), наблюдается феномен агглютинации; при взаимодействии антител с высокодисперсными антигенами (полисахариды, белки и их комплексы) образуются преципитаты (флоккуляты). В реакции преципитации благодаря поливалентной природе антигена и антитела происходит образование решетчатых структур. Во второй фазе специфической реакции также наблюдается присоединение к комплексу антиген — антитело комплемента, происходит реакция связывания комплемента. Взаимодействие антитела с антигеном может обусловливать нейтрализацию токсина антитоксином, активацию системы комплемента, реакцию немедленной гиперчувствительности.

Антитела, относящиеся к классам IgA и IgE, не обладают способностью вызывать реакции преципитации, агглютинации и связывания комплемента.

Антитоксины и реакция нейтрализации токсина антитоксином

Антитоксины — антитела, обладающие способностью взаимодействовать с соответствующими токсинами и нейтрализовать их.

Как уже было указано, более 50 видов микроорганизмов обладает способностью вырабатывать экзотоксины.

Для реакции нейтрализации токсина антитоксином требуются определенные условия: количественные соотношения, необходимое время взаимодействия и оптимальная температура. В основе нейтрализации токсина антитоксином лежит физико-химическая реакция. Внешнее проявление соединения токсина с антитоксином в условиях опыта in vitro представляет феномен флоккуляции—помутнение в пробирке, содержащей смесь токсина и антитоксина. Феномен флоккуляции является специфической реакцией и его используют в сывороточном производстве для определения степени активности или силы действия антитоксических сывороток.

За единицу измерения силы действия антитоксической сыворотки принята международная единица (ME). ME — такая доза антитоксической сыворотки, которая способна нейтрализовать определенное количество Dim токсина. В соответствии с рекомендацией Комитета экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов 1 ME считается смесь определенного количества миллиграммов гипериммунной лошадиной сыворотки в изотоническом растворе хлорида натрия с 66% (по объему) глицерина. Образцы (эталоны) таких сывороток, высушенных лиофилизацией, хранятся в Международной лаборатории биологических стандартов Государственного института сывороток в Копенгагене (Дания).

Реакция между токсином и антитоксином происходит по типу сложных соотношений, вычисляемых по специальным уравнениям адсорбционных изотерм. Опытами доказано, что в процессе обезвреживания токсина принимают участие свободные аминогруппы токсинов; их связывание сопровождается утратой токсичности.

Лечебное действие антитоксических сывороток зависит не только от их активности, количества международных единиц в 1 мл, но и активности («жадности») — быстроты, полноты и прочности соединения между токсином и антитоксином.

Методы получения в титрования сывороток. Антитоксические сыворотки получают путем гипериммунизации животных (лошадей). После окончания полного курса иммунизации в крови животных определяют количество антитоксинов, затем производят частичное или полное кровопускание, кровь собирают в бутыли, в которых она свертывается и над сгустком отделяется прозрачная желтоватая жидкость — сыворотка.

Полученную сыворотку проверяют на стерильность, апирогенность (препарат не должен вызывать повышение температуры у животных при парентеральном введении) и устанавливают титр ее, т. е. определяют количество международных единиц в 1 мл.

Титрование антитоксических сывороток осуществляют с помощью определенных стандартов токсинов на животных: морских свинках, белых мышах, кроликах, вводя им смесь определенного количества стандартного токсина и различных доз испытуемой сыворотки. Титрование, например, антитоксической противодифтерийной сыворотки производят на животных и методом флоккуляции. Основные сведения по этому вопросу имеются в практических руководствах.

Антитоксические сыворотки применяют с лечебной и профилактической целью при столбняке, ботулизме, анаэробной инфекции, дифтерии, укусе змей.